ELISA實驗丨試劑盒標準曲線不佳

　　ELISA實驗加入顯色底物后，標準品有顏色，但結果分析發現標準品最高點吸光值偏低或偏高、標準曲線無梯度等等，古朵生物技術總結如下原因：

　　一、標準曲線最高點吸光值偏高，超出儀器檢測范圍

　　ELISA標準曲線最高點的吸光值一般在3.0以下，若太高超出儀器檢測范圍，顯示OVER FLOW，可能原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、如OD絕對值靠譜，則顯色過度TMB顯色體系中建議根據S1，S2顏色進行判斷， 當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。

　　2、僅作單波長檢測由于參考波長讀取非特異性檢測，如指紋、劃痕、水漬等， 對結果也有影響。建議最終結果以雙波長為最準確。

　　二、標準曲線最高點吸光值偏低

　　ELISA標準曲線最高點的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、粉末標準品未充分溶解粉末標準品按說明書加一定體積的液體后，輕柔混勻， 室溫靜置30分鐘，充分溶解。

　　2、標準品反復凍融標準品反復凍融后活性降低。

　　3、孵育溫度、時間按說明書要求孵育條件進行孵育。

　　4、顯色時間控制TMB顯色體系中建議根據S1，S2顏色進行判斷，當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。

　　三、標準曲線無梯度

　　ELISA 實驗中標準品2倍倍比稀釋，但結果分析標準曲線沒有梯度，可能的原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、樣品或標準品污染避免污染

　　2、錯誤的樣品或標準品的稀釋按照說明書稀釋

　　3、偶聯抗體濃度過高按照說明書調整到最佳的濃度

　　4、TMB底物孵育時間過長調整到合適的孵育時間

　　5、錯誤的孵育時間或溫度按照說明書

　　6、孵育時未加蓋導致溶液揮發和污染貼封片或加蓋

　　總結:

　　得到的ELISA標準曲線，需要注意幾點：

　　1、 充分溶解標準品;

　　2、 標準品避免反復凍融;

　　3、 梯度稀釋標準品注意混勻。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。