細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒產品說明書

　　主要用途

　　細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過細胞內β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩定表達，催化生成深藍色的沉積產物，從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞作為細胞復制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細胞的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。廣泛應用于細胞生物學研究。其適用于各種人體和動物細胞或活體內(in vivo)檢測。產品即到即用，性能穩定，參數優化，著色敏感，堪稱上同類產品zui為上佳。

　　技術背景

　　細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，尤其在酸性條件下，細胞內β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細胞衰老的生物學標記。

　　產品內容

　　清理液(Reagent A)毫升

　　固定液(Reagent B)毫升

　　酸性液(Reagent C)毫升

　　稀釋液(Reagent D)毫升

　　染色液(Reagent E)毫升

　　說明書1份

　　保存方式

　　保存 染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里; 稀釋液(Reagent D)和 染色液(Reagent E)用鋁箔封裹，避免光照;有效保證6月。

　　用戶自備

　　2毫升離心管：用于配制染色工作液。

　　15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液。

　　恒溫培養箱：用于染色孵育。

　　光學顯微鏡：用于觀察染色后的細胞。

　　實驗步驟：

　　操作一、25cm2細胞培養瓶染色

　　實驗開始前，將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到2毫升離心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混勻后，放進37℃恒溫水槽里預熱，標記為 染色工作液。然后進行下列操作：

　　小心抽去25cm2細胞培養瓶里的培養液。

　　小心加入xx毫升 清理液(Reagent A)，清洗生長中的細胞表面。

　　小心抽去清理液。

　　小心加入xx毫升 固定液(Reagent B)，覆蓋整個生長表面。

　　在室溫下孵育5分鐘。

　　小心抽去固定液。

　　小心加入xx毫升 酸性液(Reagent C)，清洗細胞表面。

　　小心抽去酸性液。

　　重復實驗步驟7和8一次。

　　小心加入xx毫升 染色工作液，覆蓋整個細胞表面。

　　放進37℃培養箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現藍色(注意：避免液體蒸發)。

　　在光學顯微鏡下觀察和計數：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現藍色。

　　操作二、24孔細胞培養板染色

　　實驗開始前，將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混勻后，放進37℃恒溫水槽里預熱，標記為 染色工作液。然后進行下列操作。

　　1.小心抽去24孔細胞培養板里的培養液。

　　2.每孔加入xx微升 清理液(Reagent A)，清洗生長中的細胞表面。

　　3.小心抽去每孔里的清理液。

　　4.每孔加入xx微升 固定液(Reagent B)，覆蓋整個生長表面。

　　5.在室溫下孵育5分鐘。

　　6.小心抽去固定液。

　　7.每孔加入xx微升 酸性液(Reagent C)，清洗細胞表面。

　　8.小心抽去酸性液。

　　9.重復實驗步驟7和8一次。

　　10.每孔加入xx微升 染色工作液，覆蓋整個細胞表面。

　　11.放進37℃培養箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現藍色(注意：避免液體蒸發)。

　　12.在光學顯微鏡下觀察和計數：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現藍色。

　　注意事項

　　本產品為100次(4個24孔板)或20次(20個25cm2細胞培養瓶)操作

　　操作時，須戴手套

　　本產品的參數：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達到*化

　　使用時，避免污染母液，否則出現絮狀沉淀，影響實驗效果

　　染色工作液避免光照

　　細胞β-半乳糖苷酶活性強，孵育3小時即顯示陽性;細胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時

　　細胞染色zui長孵育時間為24小時

　　孵育時避免液體蒸發

　　本產品染色敏感，甚至對于微弱表達的酶活性仍然顯色清晰;用戶可以根據實際情況調整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處細胞呈現藍色的部位為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方染色后的細胞樣品可以在4℃冰箱里保存，同樣須避免光照。

　　本產品適合各種規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和各種培養孔板，須相應調整處理液：

　　操作容器建議處理液規格：

　　載玻片100微升

　　載玻片培養皿1毫升

　　35mm培養皿1毫升

　　96孔培養板100微升

　　48孔培養板200微升

　　24孔培養板500微升

　　12孔培養板1毫升

　　6孔培養板2毫升

　　25cm2細胞培養瓶3毫升

　　本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

　　細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒