腫瘤標志物的檢測：

腫瘤標志物包括傳統的大分子標志物（主要是大分子蛋白質）和基因標志物,大分子蛋白質以抗體為基礎進行IHC或蛋白質印跡（Western blot）檢測;基因標志物主要用RT-PCR檢測.目前針對腫瘤檢測的標志物主要有2類:
　　一是腫瘤特異性標志物,指腫瘤細胞所*的抗原或基因,特點是特異性強,但大多數實體瘤缺乏特異性腫瘤標志物,因而臨床上很難實際應用.二是組織特異性標志物,指腫瘤細胞的某種成分或表達產物在不同組織中有差異的分布,即通過檢測某些上皮或腫瘤相關基因的表達,如CK, AFP,CEA,端粒酶等作為判斷癌細胞存在的依據,特點是敏感性高,有一定的特異性,可以穩定地被檢測到,易于臨床上廣泛應用,但特異性仍不夠滿意,容易出現假陽性,如上皮來源的癌細胞和某些分化早期的造血細胞均表達CK一19和端粒酶,表面抗體與前體細胞（成紅細胞,幼紅細胞,原始粒細胞）易出現交叉反應等.所以選擇合適的標志物對提高微轉移的檢出率很有意義.下面就一些常見的腫瘤標志物作一下綜述.
　　1.細胞角蛋白（cytokeratins, CKs） CK起源于上皮細胞,是上皮細胞和上皮來源的惡性腫瘤細胞中間絲的組成成分,包括至少20種相關多膚的多基因家族,分為酸性細胞角蛋白（I T!,CK10-20）和堿性細胞角蛋白（II型,CK1 -9）兩個亞家族,CK是上皮分化的zui可靠標記物,對上皮組織的定性具有*的價值.而血液,淋巴結,骨髓組織屬于結締組織,CK在這些組織中不表達,故CK系列被認為是檢測循環癌細胞的敏感標記物.其中以CK家族中zui小的成員CK一19的表達zui為特異,從已有資料看,表現出較高的靈敏度（90%一100%）和特異性（98%一100%）.Aihara等〔''）應用RT-PCR方法檢測胰腺癌和胃癌患者外周血及術中門靜脈血中CK一19 mRNA的表達,發現腫瘤分期越晚,血循環中微轉移的陽性率也越高,提示檢測外周血中的微轉移癌有助于提高分期準確性,幫助判斷預后,并證明CK一19 mRNA是診斷循環性腫瘤細胞很有價值的標志物.CK20是MOLL等1990年發現并分離的,分子量46, 000, DNA總長度為18kb,含8個外顯子,7個內含子,其mRNA長1.75 kb, Moll等又于1992年制備出CK20的一系列單克隆抗體,為C K20的廣泛應用奠定了基礎.CK20有更嚴格的特異性上皮分布,主要分布于胃腸道勃膜上皮細胞,泌尿道傘狀細胞,表皮Merk細胞,舌味蕾細胞上.在人類腫瘤中,不同型癌CK20的表達有較大差異.結腸癌,胃腺癌,卵巢粘液腺癌,泌尿道移行細胞癌,膽囊和膽管腺癌,胰管細胞癌中CK20陽性,而在腎細胞癌,小細胞肺癌,子宮內膜癌,乳腺癌中CK20陰,t.由于CK20具有不同于其它I型細胞角蛋白的特點,使CK20成為一種新的診斷標志物,且可通過目前的試驗技術去除正常細胞的干擾.

　2.癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）和癌胚抗原信使核糖核酸（carcinoembryonic antigen RNA, CEA mR-NA） CEA是一種胃腸道腫瘤細胞以及某些幼稚細胞合成的蛋白質,可被腫瘤細胞分泌于血液內和腹水內,檢測CEA萬方數據210對消化系統惡性腫瘤的特異性較高,常應用于消化系統腫瘤的輔助診斷及惡性腹水的鑒別診斷,各因素分析證明CEA作為一種預測胃腸道癌腹膜轉移指標優于經典的腫瘤TNM分期及細胞學檢測系統.但CEA指標陽性率較低,動態監測CEA變化對判斷療效和轉歸則有較好的應用價值.近年來,采用RT一PCR技術篩查腫瘤相關mRNA用于微轉移的檢測,顯示出很好的特異性和高敏感性.CEA mRNA幾乎只存在于某些腫瘤細胞內,細胞外不存在游離CEA mRNA,因此在血循環,骨髓,淋巴結及胸,腹水等內檢測到CEA mR-NA,則提示發生了能表達CEA mRNA的腫瘤細胞的轉
移[[8-to].徐惠錦,王劍鋒等〔''",川對胃癌腹腔沖洗液進行CEA mRNA的RT一PCR檢查,與腹腔液中CEA （ peritonealCEA, p-CEA）和腹腔沖洗液細胞學檢查（peritoneal lavagecytology., PLC）比較,前者陽性表達率（55.8%）明顯高于后二者（37.2%和32.6%）,顯示了較高的敏感性,且與胃癌浸潤深度,漿膜受侵程度和類型相一致,與對照組比較亦顯示較好的特異性.Yone mura等扛1z〕指出腹腔細胞學和RT -PCR檢查結果獨立地與腹腔復發有關,而灌洗液中CEA水平則無關,腹腔細胞學檢查是zui有意義的預測方法.聯合應用CEA RT一PCR和細胞學方法可提高對腹腔復發的預測.Castaldo等用RT一PCR和dot-blot分析方法對外周血中CEA表達情況的研究顯示,健康志愿者,有明確轉移者,無明確轉移者的腫瘤患者中,CEA陽性表達率分別是.（0/16）,80%（8/10）和28.6（4/14）,,顯示了較好的特異性.Mori等檢測55例消化道腫瘤及乳腺癌患者外周血CEA mRNA,結果對照組陰性,41例行*術患者中11例（27%）陽性,已發現轉移的14例中9例陽性,并認為多次采血癌細胞間斷進人血循環可能提高陽性率.因此,及時發現外周靜脈血微轉移灶的存在,進行針對性的輔助化療非常重要.

　　3.血管內皮細胞生長因子（Vascular endothelial growthfactor, VEGF）瘤內新生血管形成是腫瘤迅速增長,侵襲及轉移的關鍵.VEGF是一種堿性可分泌的肝素結合蛋白,是比較重要和有特性的促進血管內皮及細胞生長的細胞因子,其編碼基因位于6p21. 3,有8個外顯子,由于mRNA不同的剪切形成,形成5種VEGF,其中以VEGF165zui重要,其次為VEGF121,VEGF145,VEGFI89,而VEGF206非常少見.它能通過與受體作用,一方面促使微血管內皮細胞增殖,遷移,另一方面促進微血管通透性增加,被認為是血管新生的重要啟動子.VEGF作為一種特異的內皮細胞有絲分裂原,調控腫瘤的血管形成,新生血管的結構和功能異常,也有利于腫瘤細胞逃逸導致發生轉移,具有血管生成能力的腫瘤細胞更易在轉移灶處存活和發展.通常采用ELISA法,免疫組化或RT一PCR方法等檢測血清（或血漿）及癌組織中的VEGF,
VEGF受體或VEGF mRNA.研究發現,腫瘤患者的VEGF表達異常,比健康人明顯升高,癌組織中的VEG F表達顯著高于良性及正常組織.癌組織中VEG F表達陽性者的微血管密度（microvessel densitY, MVD）顯著高于陰性者,而MVD計數與腫瘤大小和浸潤深度密切相關,在多種人類腫瘤中,腫瘤類MVD被認為是腫瘤轉移潛能的一個較可靠的預測指標,原發瘤內MVD高者腫瘤的轉移率高["〕.許多文獻報道``0,''5} , VEGF水平與腫瘤臨床分期,局部侵襲深度,淋巴結轉移及遠處轉移均有密切關系,高水平VEGF患者對化療不敏感,復發率高,生存期短,生存率低.不少作者認為血清VEGF可成為預測復發,轉移及預后的有價值的獨立因素.但也有研究表明,單一VEGF成為預測預后指標是不足.腫瘤血管形成是一個多因素參與的復雜過程,VEGF與其他生物學指標有共同和相互作用.董強剛等研究發現,只有在血循環癌細胞陽性的患者,VEGF與癌細胞含量之間才存在相關性,而在癌細胞陰性患者中,VEGF含量高低似乎對其血道轉移無影響,此研究提示癌細胞的血道轉移可能受某些轉移相關基因的控制,此類基因控制細胞增殖,凋亡及細胞外基質（extracellular Matrix, ECM）蛋白的水解等,其一旦失活（或表達）,癌細胞就獲得了轉移的潛能,VEGF促使這類具有轉移潛能的癌細胞加快進人血循環[''〕.

　4.基質金屬蛋白酶（ Matrix metalloproteinase, MMPs）MMPs是一類鋅離子依賴的催化ECM降解的重要蛋白水解酶,MMPs家族至今已發現有20多種成員,分為膠原酶（MMP-1,8,13）,基質溶解素（MMP-3,10,11）,明膠酶（MMP-2,9）,膜型金屬蛋白酶（MT-MMP）及彈力蛋白酶（MMP-12 ）等5類.MMPs在多種惡性腫瘤中表達增高,腫瘤的間質中也有表達,提示MMPs與腫瘤的侵襲,轉移有關.MMPs破壞局部組織結構,促進腫瘤生長;破壞基底膜屏障,利于腫瘤轉移;通過對ECM的改建,促進腫瘤新生血管形成.而金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP ）則可抑制這個過程.體外實驗證實MMP-2表達與腫瘤的轉移表型有關,被認為是腫瘤遠處轉移的必需條件.MMP一能特異性降解明膠及膠原,在腫瘤細胞侵襲穿透基底膜的過程中起著重要的作用.Westerlund等[16〕采用免疫組化法研究發現MMP一表達與惡性腫瘤的復發密切相關,其中復發患者表達率為83%,表達MMP-2的患者較不表達者易復發（P<0.05）.腫瘤間質中表達MMP一與轉移有關,陽性表達者53%發生轉移,且惡性腫瘤中MMP一表達與預后呈負相關.蔡威等["]用免疫組化,p法檢測卵巢囊腺瘤及卵巢癌組織的MMP-2, MMP一及其組織抑制物TIMP-2的表達,結果提示三者在卵巢癌組織中陽性表達率明顯高于卵巢囊腺瘤,與卵巢癌的臨床分期,病理分級及有無淋巴結轉移相關,MMP-2,MMP一蛋白高表達,可作為卵巢癌具有轉移傾向的臨床參考指標.

　5.其他癌轉移標志物薪蛋白（MUC1）基因也是一種上皮組織特異性標志物,編碼上皮組織細胞膜上粘蛋白的核心蛋白,在正常外周血,骨髓及淋巴結中無MUCl表達,若在這些非上皮組織中檢測到MUCl,就提示癌組織的存在。因此,檢測CAMs對預測轉移也具有重要的意義.

腫瘤轉移是一個多因素,多階段,多步驟的復雜過程,因此對腫瘤微轉移的研究也是一項復雜的工程.這項工作還剛剛開始,有待深人開展,對進一步認識腫瘤,克服腫瘤必將提供有力的幫助。