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當(dāng)前位置：上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>乳過氧化物酶法（LPO）
本法反應(yīng)溫和，對(duì)抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應(yīng)用。缺點(diǎn)是標(biāo)記率較低，一般為20～40%。
1．原理此法是利用乳過氧化物酶（Lactoperoxidase）有促進(jìn)微量過氧化氫對(duì)125I-的氧化作用，生成125I+，并標(biāo)記在多肽、蛋白質(zhì)酪氨酸分子上。
2．方法以標(biāo)記蛋白質(zhì)抗原為例。
（1）反應(yīng)液組成：蛋白質(zhì)2～5μg溶于磷酸緩沖液10～25μl中，加入Na125i 1m Ci（10μl）、乳過氧化物酶溶液25ng（10μl）、H2O2200ng（10μl）；
（2）在室溫保溫7min；
（3）加入H2O2200ng（10μl）；
（4）過7min再加入H2O2（3μl）；
（5）保溫7min后，加入0.5ml、10mmol/L巰基乙醇以停止反應(yīng)；
（6）10min后加入NaI載體溶液1ml ；
（7）按常規(guī)方法分離純化。
3．注意事項(xiàng)
（1）LPO質(zhì)量好壞，可直接影響標(biāo)記率，LPO應(yīng)在使用前新鮮配制，以防酶活性降低。
（2）LPO用量應(yīng)小于總蛋白質(zhì)用量的1%，以減少酶自身碘化而帶入的放化雜質(zhì)。
（3）碘化反應(yīng)速率分析表明，酶的催化速度很快。
（4）碘化反應(yīng)在pH4.0～8.5較寬范圍內(nèi)均可進(jìn)行，zui適pH值應(yīng)依據(jù)蛋白質(zhì)本身性質(zhì)而定。
（5）H2O2應(yīng)保持低濃度，如高于0.1mmol/L，對(duì)酶的活性將有抑制作用。
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