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HRP（辣根過氧化物酶）標(biāo)記抗體流程

時間：2011/12/23閱讀：623
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1. 8 mg 辣根過氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml雙蒸水溶解，液體呈棕色。
2. 放入一個磁力攪拌子，電磁攪拌同時逐滴緩緩加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室溫下繼續(xù)攪拌40 min，液體呈現(xiàn)草綠色。
3. 將全部溶液用滴管裝入反復(fù)用去離子水沖洗的透析袋中，4 oC 對1 mM pH 4.4的NaAc透析過夜，中間換液3－4次，每次300 ml，溶液zui終呈淺棕色。
4. 按照酶：抗體＝1：1的比例準(zhǔn)備抗體，抗體濃度不小于2 mg/ml。
5. 對0.01 M Na2CO3透析過夜，中間換液3－4次。
6. 將透析好的HRP溶液（淺棕色）裝入玻璃瓶，加入0.2 M Na2CO3溶液將pH調(diào)整至9.0， 混勻后立即加入透析好的抗體，邊加邊用電磁攪拌器攪拌。
7. 用0.2 M Na2CO3溶液將HRP/抗體混合物的pH調(diào)整至9.0（9-10之間就可以），室溫繼續(xù)攪拌3hr。
8. 加入新配制的硼氫化鈉溶液100 ul，4 oC放置2 hr。
9. 4 oC，1×PBS中充分透析，每2hr換液一次，共換4 次。

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