[ 原理 ] 抗原與抗體結合形成的復合物能激活補體，若抗原是綿羊紅細胞，那么補體被激活后，使綿羊紅細胞溶解，出現溶血現象。補體結合實驗是一種有補體參與，并以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應。參與本反應的五種成分可分為兩個系統(tǒng)，一為待檢系統(tǒng)，即為已知抗原(或抗體)和待檢抗體(或抗原)另一個為指示系統(tǒng)，即綿羊紅細胞和其相應的溶血素。待檢抗原，抗體和先加入的補體作用后，再加入指示系統(tǒng)。若待檢系統(tǒng)中的抗原 - 抗體相對應，兩者特異性結合后激活補體，再加入的指示系統(tǒng)無補體結合，不出現溶血，是為補體結合實驗陽性；若待檢系統(tǒng)中的抗原與抗體不對應或缺少一方，補體不被激活，當指示系統(tǒng)加入后，綿羊紅細胞 - 溶血素復合物激活補體，產生溶血現象，是為補體結合實驗陰性。

本實驗敏感性，特異性均較高，可用于檢測某些病毒病，立克次體病，梅毒病等。由于參與反應的各成分之間要求有適當的量的關系，因此，做本實驗之前必須通過一系列預備實驗來確定補體，溶血素，抗原或抗體的使用量。

[ 方法 ]

一)溶血素單位滴定

1 材料：溶血素血清，抗原， 2% 綿羊紅細胞懸液，補體(1:30 取豚鼠新鮮血清)，生理鹽水，小試管，吸管,37 ℃水浴箱。

2 實驗過程

1 )按表分別加入各種不同稀釋的溶血素 0.2ml 及其他成分。

2 )充分混勻后置于 37 ℃水浴箱中 30 分鐘，然后觀察結果。

3 )能呈現*溶血的zui高稀釋度的溶血素為 1 個單位

4 )配制 2 個單位的溶血素溶液。

例如下表的結果表明，第11管(1:9600 倍稀釋)中0.2ml溶血素為1個單位。實驗室常用0.2ml中含2個溶血單位的稀釋液，即1:4800,配制時可以取 1:100 倍稀釋的溶血素1ml 加生理鹽水47ml 。

例：溶血素的滴定表 :

二)補體單位滴定

1 材料

1)補體 1:30 稀釋。

2)抗體2單位溶血素

3)抗原2%綿羊紅細胞

4)生理鹽水,小試管，吸管,37℃水浴箱

2 方法

1)依下表加入1:30 稀釋的補體。

2)依次加入其他各成分至每管中,37℃水浴后觀察結果

3)補體單位的確定 凡能使一定量紅細胞發(fā)生*溶解的zui小補體量，稱為1個確定單位。如下表中自第3管可出現*溶血現象，因此第3管 0.1ml)所含補體為1個確定單位。

由于在實際應用時補體有一部分損失，故需酌量增加一些，通常取其次高的一管補體量稱為1個使用單位。在下例中：

1 個確定單位 =0.1ml 1:30 稀釋的補體。

1 個使用單位 =0.12ml1:30 稀釋的補體。

4 )補體的稀釋 若使每 0.2ml 補體含 2 個使用單位，可照下式計算： 30 :(2 × 0.12 ) = x : 0.2

0.2 × 30

X= =25

0.24

即將補體稀釋25倍，取0.2ml即可。

三)正式實驗

正式實驗可以做定量的，也可以做定性的。本實驗用傷寒桿菌的提取液為抗原，與其免疫血清做定性實驗。

1 材料

1)補體 1:25 稀釋

2)抗體 1:5 稀釋的傷寒血清

3)抗原 1:50 稀釋的傷寒抗原,1:50 稀釋的痢疾抗原

4)指示系統(tǒng)2單位溶血素,2% 綿羊紅細胞。

5 )其他 同預備實驗

2 方法

按下表順序操作:

3 結果

觀察各管溶血情況，記錄并分析其意義。

4 注意事項

1 )以細菌做抗原時，應使用細菌的提取液而不是懸液，通過滴定找出zui合適的稀釋度

2 )所用試管，微量板，吸管等器材必須清潔無脂，各試劑無菌，以防止抗補體現象。

3 )除了免疫球蛋白外，本實驗中的其他成分均需要滴定。