[實驗原理]

補體能使抗體致民敏的羊紅細胞發生溶血反應,根據溶血程度可測定補體總活性。以溶血百分率作縱坐標,相應的血清補體量為橫坐標繪圖,可知在50%溶血附近補體的量與溶血的程度呈直線關系。因此以50%溶血作為終點較以100%溶血作為終點更為敏感。故稱為50%溶血試驗,即CH50(50%complement hemolysis)。產生50%溶血所需補體的量為一個CH50單位。

[實驗材料]

待測患者血清

5%綿羊紅細胞懸液

3μ/0.1ml溶血素

PH7.2巴比妥緩沖液或生理鹽水

370C水浴箱、小試管、吸管等

[實驗方法]

取小試管8支,依次編號；

1-6管加入巴比妥緩沖液0.2ml；

于第1管加入待測血清0.2ml,混勻后吸出0.2ml加入第2管 …… 依次對倍稀釋至第6管,從第6管吸取0.2ml棄去,此時各管血清稀釋度依次為1/2、1/4 、 1/8……1/64 ；

1-6 管加入巴比妥緩沖液 0.2ml,第7管加0.4ml,第8管加0.5ml ，

1-7加溶血素0.1ml ；

每管各加綿羊紅細胞 0.1ml,輕輕搖勻,置370 C水浴箱30分鐘,40C 冰箱過夜。

血清總補體活性測定操作表 單位： ml

6為實驗測定管；第7管為溶血素對照管；第8管為綿羊紅細胞對照管

50% 標準溶血管的配置：

取5%綿羊紅細胞1ml,離心后棄上清,加入蒸餾水0.5ml,使紅細胞全部溶解,再加雙倍(1.7%)生理鹽水0.5ml,混勻后加5%綿羊紅細胞1ml。混勻取此液 0.1ml加巴比妥緩沖液0.5ml即為50%標準溶血管。

[實驗結果]

以50%溶血管為標準,肉眼依次觀察,與標準管zui接近者為終點管。按下式計算1ml血清的補體單位。

血清中補體活性單位(CH 50 單位) = 1/血清總量×終點管稀釋倍數

本法測得血清總補體活性的正常值為80-160CH50μ/ml

[注意事項]

待測血清要求新鮮，一般要求在去血后 2小時做完實驗。

試管口徑大小一致，清潔透明，便于觀察。

50%標準溶血管配置必須用同批實驗用綿羊紅細胞，并同時方入冰箱。