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血空斑試驗 (plaque forming cell assay ， PFC) 是 Jerne 于 1963 年設計的用于體外檢查和計數某種抗體形成細胞的一種方法。該方法是將 SRBC 免疫動物，隨后取其脾制成淋巴細胞懸液與高濃度的 SRBC 混合后加入瓊脂凝膠中，其中每個釋放溶血性抗體的細胞可致敏其周圍的 SRBC ，當加入補體時，致敏的 SRBC 被溶解而形成了局部的溶血空斑，每一個空斑代表一個抗體形成細胞。本實驗采用玻片法。
【材料】
1. 動物，小白鼠，體重 18 — 22g 。
2. 補體，脈鼠新鮮血清（用前須經 SRBC 吸收： 1ml 壓積 SRBC 加 20ml 補體，置 4 ℃ 20 分鐘，離心，取上清，用 hanks 液稀釋為 1 ： 10 ）。
3 ．主要試劑：瓊脂（表層基 0.7% ，底層基 1.4% ，用 Hanks 配制）、用 Hanks 配制的 20%SRBC 、 DEAE 葡聚糖溶液（右旋糖酐） (10mg ／ m1) 。
4. 載玻片。
5 ．儀器設備 37 ℃ 恒溫箱、 解剖 顯微鏡 。
【方法】
1. 小鼠免疫及脾細胞懸液的制備
(1) 以 4 × 10 8 ／ m1SRBC 免疫小鼠， 4 天后取出免疫和對照小鼠的脾。
(2) 稱重后置含冷 Hanks 的培養皿中，將脾在 l00 目不銹鋼網上研磨后，再經 200 目不銹鋼網過濾，然后將細胞收集于刻度離心管中 ( 將試管置冰浴中 ) 。
(3) 用 Hanks 懸浮細胞，調細胞濃度到 2 × l0 6 ／ m1 。
2 ．瓊脂凝膠板的制備
(1) 預熱底層瓊脂，倒 4ml 于載玻片上，待凝。
(2) 將底層基載玻片和所有試劑（除脾細胞）預溫 40 ℃ 左右。
(3) 在表層瓊脂中加入牛胎血清、右旋糖酐、 20%SRBC 和脾細胞懸液各 0.1ml ，然后傾注入鋪有底層基的載玻片上，凝固后于 37 ℃ 孵育 1 小時。然后加 1.0ml 補體，再次孵育 30 分鐘。用放大鏡或肉眼或顯微鏡觀察溶血空斑，并計數。
【結果觀察】
將平皿置解剖顯微鏡下計數空斑數。一般計算 4 塊載玻片上的空斑均數，也可分別計數每塊載玻片的空斑數，計算出每組動物每 100 萬個脾細胞中含空斑形成細胞的平均值 ( 圖 8-1) 。
【注意事項】
1. 一般選用純系小鼠。
2.在加入細胞之前，瓊脂平板制備時要使瓊脂*溶解，加入脾細胞時應檢查是否充分均勻分布，因一時性的冷激會導致形成小的凝膠灶，造成觀察和判斷困難。
3.注意防止瓊脂泡沫的出現。
4 ．摘除的脾不宜立即放入冰浴中的液體中，可顯著降低空斑計數。
圖 8-1 溶血空斑試驗
通過混合檢測細胞和抗原致敏羊紅細胞來測定抗體形成細胞。通過孵育，圍繞羊紅細胞的細胞分泌抗體，羊紅細胞由抗體包被，然后加入補體，羊紅細胞即被裂解。右圖顯示一個 B 細胞位于空斑中央。
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