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上海信帆生物:T細胞受體測序(TCR seq)

2016-5-8  閱讀(2129)

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T細胞受體(T cell receptor,TCR)是T細胞表面特異性識別抗原和介導免疫應答的分子,是人類基因組中多態性zui高的區域之一,決定著人的免疫系統如何適應環境的變化。T細胞受體庫的多樣性(包括基因重組以及選擇性表達)直接反映了機體免疫應答的狀態。

TCR可分為TCRα/β和TCRγ/δ兩種類型, 外周血T細胞主要為TCRα/β的T細胞, 是介導機體特異性細胞免疫反應的主要細胞。如圖1所示:TCRβ基因由可變區(V)、多變區(D)、結合區(J)和恒定區(C)四部分基因片段組成,形成互補決定區(complementarities determining region, CDR)和間隔的4個骨架區(framework region, FR)。

在T細胞發育過程中CDR1,2和FR區域相對保守,CDR3區由V、 D和J 進行重排(如圖2所示)而形成具有功能的TCR編碼基因(T細胞克隆),由于V (65-100種)、D (2種)、J (13種)基因片段本身具有多樣性,此外,由于在重排的過程中,在VD及D-J的連接區經常有非模板的核苷酸的隨機插入或刪除,進一步增加了CDR3區的多樣性(連接形成的多樣性約為2 × 1011)。這種基因片段連接的不準確性使TCR的表達呈多樣性, 以識別各種不同的抗原。正常個體在無抗原刺激時,TCR基因重排是隨機的,因此正常人外周T細胞呈多家族、多克隆性特點。不同抗原(腫瘤、疫苗、病院微生物或者移植物等)刺激后,TCR V區基因可對該\抗原產生特異性識別,并使帶有這類基因的 T細胞得到優勢擴增,可用于分析不同 TCR V亞家族 T細胞的表達和利用。

T細胞受體測序(TCR seq),采用多重擴增的手段獲取TCRβ的CDR3區域,結合高通量測序技術,結合生物信息學分析手段,分析VDJ重排的方式等,廣泛應用于腫瘤免疫、自身免疫性疾病、*免疫監測、疫苗注射免疫監測等領域。

技術特點

多重擴增:使用多組PCR引物對TCRβ的CDR3區域進行擴增,而非探針捕獲

高通量:一次測序得到別條數的序列信息

高準確性:從幾個到幾十萬個拷貝的計數

高分辨率:可以檢測至單堿基差異

重復性好:深度測序保證了檢測的隨機性,可不需技術重復

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