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一、實驗目的
1. 掌握Comori 法的基本原理和方法。
2. 觀察酸性磷酸酶在細胞內的分布狀況。
二、實驗原理
酸性磷酸酶能分解磷酸脂而釋放出磷酸基，在PH5.0 的環境中，磷酸基能與鉛鹽反應形成磷酸鉛。但因其是無色的，所以再經過與硫化銨作用，形成棕黑色的硫化鉛沉淀，由此就能顯示酸性璃酸酶在細胞內的存在與分布。
本實驗的技術特點是：①用冷凍涂片和中性福爾馬林固定，可避免在固定、包埋及制片過程中酶的失活，保證了實驗的穩定性。②采用較短的作用時間，可避免細胞質內其它蛋白質及核內出現陽性假象，保證了實驗的可靠性。③以姬姆薩染色的巨噬細胞為觀察對象，細胞核及細胞輪廓以及細胞質中反應沉淀的顆粒都比較清晰，有助于深入理解細胞吞噬作用、浴酶體功能和分布以及溶酶體標志酶——酸性磷酸酶的性質。
三、實驗用品
（一）材料小鼠腹腔液涂片(重點觀察巨噬細胞)
（二）器材高壓滅菌鍋、冰箱、注射器、載玻片、蓋玻片及溫箱。
（三）試劑
1. 10%中性福爾馬林(pH6.8～7.2)
甲醛 10ml
醋酸鈉 2g
蒸餾水 90ml
2. 酸性磷酸酶作用液
蒸餾水 90ml
0.2mol/L 醋酸緩沖液(pH4.6) 12ml
5%* 2ml
3.2%β-甘油磷酸鈉 4ml
先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加醋酸鉛溶液，另—份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩緩混合，邊混勻邊攪勻。若PH＜5.0，可加少量醋酸調節。臨用前配制。配好后的作用液應透明無絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴重影響實驗結果。
3. 1%硫胺溶液
硫化胺 1ml
蒸溜水 9ml
4. 姬姆薩染液(1:30)
姬姆薩原液 3 滴
磷酸鹽緩沖液(PH6.8) 5ml
5. 3%淀粉肉湯
牛肉膏 0.3g
蛋白胨 1.0g
氯化鈉 0.5g
蒸餾水 100ml
高壓滅菌9.9×104Pa(15 磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，60～80℃水浴溶
解后，4℃冰箱保存備用。
四、實驗操作
1. 取小白鼠1 只、每日腹腔注射6%淀粉肉湯1m1，連續注射3 天。
2. 第3 天注射后3～4h，脫頸處死小鼠，打開腹部皮膚，暴露腹膜，再向腹腔內注射生理鹽水2ml，過3min 后在原注射部位抽取腹腔液0.1～0.2ml。
3. 將腹腔液滴在預冷的載玻片上，每片1～2 滴。將玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱內(4℃)，讓細胞自行鋪展。
4. 30min 后，將玻片轉入10%中性福爾馬林，4℃冰箱內固定30min。
5. 自來水漂洗5min，把水瀝干。
6. 轉入酸性磷酸酶作用液中，37℃處理30min。
7. 自來水漂洗片刻。
8. 1%硫化胺處理3～5 min。
9. 自來水沖洗，甩干。
10. 用1:30 的姬姆薩染液染色15min。
11. 自來水沖去染液，用磷酸鹽緩沖液臨時封片，鏡檢。
12. 對照實驗
將第3 步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min，使酶失活，再進行6～11
步的同樣實驗。
五、實驗結果
在巨噬細胞的細胞質中，出現許多棕色或棕黑色的顆粒和班塊。部分細胞內，酸性磷酸酶極為豐富，整個細胞質區域都有黑色沉淀。中性粒細胞呈現陰性反應。
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