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干擾素(IFN)根據(jù)其產(chǎn)生細(xì)胞不同和理化性質(zhì)、犐z物學(xué)特性的差異可分為α干擾素(IFN-α)、β干擾素(IFN-β)和γ-干擾素(IFN-γ)。它們在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、抗病毒感染中具有重要作用。檢測IFN的方法主要分為定量測定(常用elisa)和生物學(xué)活性的檢測，后者較為常用。
(一)原理
干擾素能刺激某些指示細(xì)胞(如人羊膜上皮細(xì)胞Wish株、人喉癌細(xì)胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺單層細(xì)胞)產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而使細(xì)胞免受水皰性口炎病毒(VSV)的攻擊，根據(jù)待測樣品不同稀釋度的保護(hù)能力，計算出干擾素生物學(xué)活性單位。
(二) 操作步驟
96孔培養(yǎng)板中加入不同稀釋度的IFN和標(biāo)準(zhǔn)IFN，
每個稀釋度設(shè)3孔，每孔50μl，病毒對照不加IFN
↓
每孔加入100μl 1.5～2×10５／ ml Wish
或Hep-2細(xì)胞懸液，37℃、CO孵箱培養(yǎng)6～12h，
使細(xì)胞貼壁為單層
↓
每孔加入50μl含100個 TCID50 VSV,
細(xì)胞對照不加病毒液
↓
根據(jù)細(xì)胞病變狀態(tài)，終止培養(yǎng)前3～4h
加入5mg／ml MTT, 15μL／孔
↓
加入適量生理鹽水，用滴管輕輕吹吸
棄去懸浮病變細(xì)胞和死細(xì)胞
↓
200μl／孔 二甲亞砜(DMSO)，作用10min
↓
測OD(570nm),表示活細(xì)胞中含甲 的量，
也可用剛果紅攝入法、結(jié)晶紫染色法
測定IFN對活細(xì)胞的保護(hù)水平
計算:
以保護(hù)半數(shù)(50％)細(xì)胞免受病毒損害的zui高干擾素稀釋度為1個干擾素活性單位。也可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得待測樣品的IFN活性單位。
(三) 試劑和器材
1. VSV
2. WISH、HeP-2細(xì)胞株或人胚肌皮或肺單層培養(yǎng)物。
3. MTT
elisa試劑盒,elisa kit,IL-2 elisa試劑盒,IL-6 elisa試劑盒,IL-10 elisa試劑盒,TNF-a試劑盒,酶聯(lián)免疫分析試劑盒,人血清,鹽酸鹽,試劑盒-南京信帆生物技術(shù)有限公司
