實體組織材料細胞分離是指從動物機體取出相關的組織，包括正常或病變的，借助酶或物理方法將其分散成單個細胞的過程，也稱動物組織體外培養。動物組織分離培養起源于19 世紀胚胎學技術的應用，1907年，美國生物學家Harrison采用蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養法將蛙胚的神經組織培養在淋巴液中，保持存活了幾周，并觀察到細胞突起的生長過程， Harrison成為動物組織體外培養的奠基人。法國學者Carrel于1923年設計了卡氏培養瓶，提 出動物組織培養中無菌操作的重要性，他從雞胚中獲得的心肌組織成功維持了34年。1951 年，Earle發明了體外培養動物細胞的人工合成培養基。1957年，Dulbecco等人采用胰蛋白酶消化處理和液體培養基的方法，獲得了單層細胞培養。隨著技術的不斷發展，現在動物實體組織材料分離培養已成為很成熟的一種技術。

(1)機械分離法

    機械分離法指通過各種物理方法將動物的組織、器官或腫瘤塊分離成單個細胞的方法， 常用的方法是用剪刀剪碎、吸管反復吹打或用擠壓過濾的方法。

①切割分離細胞：用剪刀或者手術刀片將組織塊處理成幾毫米的碎塊，然后通過機械力將其制成單細胞懸液的方法。此種方法對細胞損傷比較大，得到的細胞懸液中的死細胞比較多。

②機械分散：對于纖維組織含量比較少的組織或腫瘤塊，可以將組織碎塊放到注射器中，然后用活塞將組織塊通過針頭將其壓出；或將組織碎塊置于細胞篩上，用鈍器(常用注射器活塞)擠壓組織塊通過細胞篩從而制成單細胞懸液。

(2)消化分離法

    消化分離法是將組織或腫瘤塊剪碎，然后用酶等生物試劑(一般用0．1％～O．25％的胰蛋白酶)或化學試劑(一般用EDTA)消化處理組織塊，使組織塊分散從而制成單細胞懸液。此種方法獲得的小懸液可以直接用于培養?？梢杂糜隗w外解離組織的蛋白消化酶有多種，如胰蛋白酶、膠原酶、鏈蛋白酶等，一般建議消化液中不含Ca 2+和Mg 2+ ，因為這兩種離子對酶有一定的抑制作用。選用何種消化酶來進行消化，需要根據消化的組織來決定，有時使用多種酶聯合進行消化。

    使用酶消化組織塊，常用熱消化(37 ℃)或冷消化(4℃)兩種處理方式。37 ℃消化時，一般處理時間為30 min，可以將消化液放到搖床上，緩慢搖晃，每隔10 min觀察消化情況，如果組織塊比較緊密，可以適當延長消化處理時間，zui長的可以消化數日。冷消化則是將放有組安塊的消化液置于4℃冰箱中消化過夜，此種消化方式不需要搖晃，靜止放置即可。