(1)pH

    多數細胞系在pH 7．4下生長得很好。盡管各細胞株之間，細胞生長pH值變化很小。一些正常的成纖維細胞系在pH 7．4～7．7生長，而一些轉化細胞系在pH 7．O一7．4更合適。據報道，上皮細胞可在pH 5．5維持。為確定pH值，做一個簡單的生長實驗或特殊功能分析。

    酚紅常用作pH指示劑。pH 7．4呈紅色，pH 7．0變橙色，pH 6．5變黃色，pH 7．6紅色中略帶藍色，pH 7．8呈紫色。

(2)緩沖

    培養基要在兩種條件下有一定的緩沖作用：一是開放式培養條件下，CO2的釋放引起pH升高；二是細胞在高密度下，轉化細胞系大量產生CO2和乳酸，引起pH下降。為了穩定pH值，可以加入緩沖物。

    盡管碳酸氫鈉緩沖系統在生理pH下的緩沖能力差，但由于它毒性小，成本低，對培養物有營養作用，所以它仍比其他緩沖系統使用得多。HEPES在pH 7．2～7．6緩沖作用比其他緩沖系統強很多，現在廣泛采用的濃度是10 mmol／L或20 mmol／L。

(3)滲透壓

    多數培養細胞對滲透壓有很寬的耐受范圍。人細胞漿的滲透壓是約290 mOsrn／kg，因而推測這是體外人細胞的值，這與其他細胞不同(如小鼠約是310mOsm／kg)。實際上，大多數細胞在260—320 mOsm／kg之間*可行。更高的滲透壓通常會使細胞生長速率減緩，但也可使蛋白產物的合成速率加快。

(4)溫度

    溫度除了對細胞生長有直接作用之外，也會影響pH。這是因為低溫下CO2溶解度增加，緩沖劑的離子化和pKa上的變化，培養基的pH值也隨之發生變化。室溫下應調節到比36．5℃下低0．2個pH單位。*次配培養基時，將培養基加入血清，在36．5℃下和合適的氣體條件下培養樣品過夜，檢查pH。

(5)黏度

    培養基的黏度主要受血清含量的影響，多數情況下，對細胞生長沒有影響。但當細胞懸浮液需要攪拌時(如懸浮培養物被攪拌或者胰蛋白酶消化后解離細胞時)，培養基的黏度就是一個重要的影響因素。黏度大，細胞受損小。若在攪拌時細胞受到損害，可以用羧甲基纖維素、聚乙二醇或聚乙烯基毗咯烷酮增加培養基的黏度，減輕細胞損害。在低血清濃度或無血清下，這一點特別重要。

(6)表面張力和泡沫

    培養基的表面張力可促進培養物貼附到介質上，但很少用某種方法控制它。懸浮培養時，用含5％CO2的空氣在含血清培養基中鼓泡，會產生泡沫。加入硅油消泡劑降低表面張力，有助于防止泡沫生成。

    泡沫的作用還不清楚。但泡沫會使蛋白質的變性速率增加；如果泡沫達到培養容器的頸部，也增加了污染的危險。泡沫在液面上的破碎過程是能量快速釋放的過程，會造成細胞的嚴重傷害。細胞的輕度疏水性促使細胞在氣泡上升過程中向氣一液界面聚集，并隨氣泡上升至液面，在氣泡破碎時，加重了對細胞的傷害，如果泡沫很穩定，還會造成泡沫中細胞的營養缺乏。懸浮細胞培養過程中，必須考慮氣泡的作用，通常用改變通氣方法或加入保護劑的方法來減少對細胞的損傷。