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通過在支持物(如蓋玻片)上培養(yǎng)貼壁細胞,可以應用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測。該方法的優(yōu)點是細胞貼壁牢固,能夠維持細胞生長時的狀態(tài)。
一、材料
1.待培養(yǎng)細胞。
2.試劑75%乙醇、蒸餾水、培養(yǎng)液。
3.器具蓋玻片、蓋玻片鑷、6孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、紗布。
二、操作步驟
1.用蓋玻片鑷將蓋玻片從75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布。
2.將蓋玻片輕輕放人6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2~3片)。
3.將6孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿放在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20~30cm處照射2~3h。
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入6孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中。
5.將6孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中放在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2~3d,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將6孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿取出,用蓋玻片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
三、注意事項
1.玻片培養(yǎng)法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法。
2.所使用的蓋玻片應為玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理。
3.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在O.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5~10min并自然晾干。
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