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稀釋平板分離法

時間:2016/1/29閱讀:638
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    細菌純種分離的方法有兩種:稀釋平板法。ELISA試劑盒

(一)稀釋平板分離法

1.取樣

用無菌錐形瓶到現場取一定量的活性污泥或土壤或湖水,迅速帶回實驗室。

2.稀釋水樣

工作前,用鑷子取出一塊酒精棉球擦手、鑷子以及工作臺,待工作臺干凈后,點燃酒精燈。將1瓶90m1和5管9m1的無菌水排列好,按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6依次編號。在無菌操作條件下,用10m1的無菌移液管吸取10m1水樣 (或其他樣品10g)置于*瓶90m1無菌水 (內含玻璃珠)中,將移液管吹洗3次,用手搖10分鐘將顆粒狀樣品打散。即為10-1濃度的菌液。用1m1無菌移液管吸取1m1的10-1濃度的菌液于一管9m1無菌水中,將移液管吹洗3次,搖勻即為10-2濃度菌液。用同樣的方法依次稀釋到10-6。ELISA試劑盒

3.平板的制作

    取10套無菌培養皿編號,10-4、10-5、10-6各3個,另1個為空氣對照。取1支1m1無菌移液管從濃度小的10-6菌液開始,以10-6、10-5、10-4為序分別吸取0.5m1菌液于相應編號的培養皿內 (注:每次吸取前,用移液管在菌液中吹吸使菌液充分混勻)。或者直接用微量移液槍移取0.5ml菌液,每移一次換一個槍頭,移取液體前,用70%乙醇對進入試管的槍體進行擦拭消毒。加熱融化已滅菌的培養基,當培養基冷卻至45℃左右時,進行無菌操作倒平板。倒入培養基后將培養皿平放在桌上,順時針和反時針來回轉動培養皿,使培養基和菌液充分混勻,冷凝后即成平板,倒置于30℃恒溫箱中培養48小時,然后觀察結果注:若在無菌室內操作。取 “對照”的無菌培養皿,待平板待凝固后,打開皿蓋10分鐘后蓋上皿蓋,倒置30℃箱中培養,48小時后觀察結果。ELISA試劑盒

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