四君子湯是中醫(yī)學(xué)“益氣健脾”治則和治療“脾虛證”的經(jīng)典方和代表方。先前的研究表明：四君子湯對消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的功能具有調(diào)節(jié)作用，“脾虛證”主要表現(xiàn)為消化系統(tǒng)功能的減退和紊亂、免疫功能改變等，四君子湯可部分逆轉(zhuǎn)這些變化。腸道粘膜免疫系統(tǒng)是消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的重要組成部分，脾虛的病機(jī)和臨床表現(xiàn)與腸道粘膜免疫受損的某些病證，如潰瘍性結(jié)腸炎、炎癥性腸病等的表現(xiàn)有相似之處，兩者關(guān)系密切。多糖是一類具有重要生物活性的物質(zhì)，具有免疫活性，對腸道粘膜免疫系統(tǒng)功能也有影響。四君子湯中黨參、白術(shù)、茯苓和甘草均含有豐富的多糖，而且粘膜上皮細(xì)胞表面的很多細(xì)胞膜分子為糖或糖基化合物，多掂有可能通過與腸道上皮細(xì)胞的這些分子相互作用而發(fā)揮效應(yīng)。據(jù)此，作者提出的科學(xué)假設(shè)為：四君子湯總多糖在四君子湯復(fù)方藥物活性的發(fā)揮中起重要作用，它有可能通過對小腸上皮細(xì)胞功能的影響而發(fā)揮對腸道粘膜吸收和免疫功能的調(diào)整作用，目前尚未見有這方面的研究報道。 圍繞上述研究目的，本文以大鼠小腸上皮細(xì)胞株IEC-6細(xì)胞為研究對象開展了以下幾方面的研究工作，即：四君子湯總多糖及各單味藥多糖對IEC-6細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、細(xì)胞粘附以及對其基因表達(dá)譜的影響，主要結(jié)果如下： 1．四君子湯總多糖及各單味藥多搪對IEC-6細(xì)胞增殖的影響 采用MTT法以及細(xì)胞計數(shù)法表明，四君子湯復(fù)方總多糖去蛋白成分PPS以及 未去蛋白成分 PS對大鼠小腸卜災(zāi)細(xì)胞株 1［C－6細(xì)胞的生長均具有明顯的促進(jìn)作 用，其中去蛋白成分PPS對I［C－6糾l胞數(shù)量的增加爛勢較未去蛋白成分m為奸， 持續(xù)觀察四君于湯總多糖與門。C－6糾1胞孵有不同時問葉其生長的影響，結(jié)果表明 PPS不同劑量組于不同的培養(yǎng)時問對KC－6細(xì)胞的生長均有促進(jìn)作用，但以PnS 200pg加 與細(xì)胞孵行1天和以n‘」m（小g。ml與細(xì)胞孵育2天作用足著，提示＊‘x 對IEC－6細(xì)胞生長的促進(jìn)作用可能具有一定的時效關(guān)系c當(dāng)采舊消炎痛造成 IEC－6細(xì)胞生長抑制的模型時，四君于二勿總多糖可使其恢復(fù)至小常水平。觀察了 四君于湯中各單味藥多糖及總多糖 X＋I(xiàn)［C－6細(xì)胞的增佰的影響，結(jié)果表明各多糖 的作用存在差異，沃警多糖具有明顯的促進(jìn)細(xì)胞上長的作用，h草多搪與黨參多 糖的作用不顯著，而白術(shù)多糖則具有明巳的抑制細(xì)胞生h的作川c當(dāng)采用每兩味 多糖組合時，即以黨參加白術(shù)，黨參加議箏，黨參加甘草，白術(shù)加伏各，白術(shù)加 甘草，慶菩加甘草為兩兩組合，觀察組合后的多糖與總多糖的作用差異，結(jié)果衣 明，所有兩兩組合的多糖作用強度遠(yuǎn)個如四君人為總多糖，提示四君子湯總多糖 的作用可能是各種單味藥多糖綜合作用的結(jié)果，也提示中藥復(fù)方用藥可能具有一 定的合理性。 2．四君子湯總多糖及各種單味藥多糖對壓－6細(xì)胞遷移的影響 采用一單面刀片在 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中央刮除約 27In。X 10mm面積的細(xì)胞，造 成細(xì)胞損傷后細(xì)胞修復(fù)和細(xì)胞遷移模型。觀察四君下湯總多糖對 IEC十細(xì)胞遷移 的作用。實驗結(jié)果表明四君于二勿。匕多糖士蛋白成分1個S及未去蛋白成分卜S對 IEC－6細(xì)胞遷移均具有明顯的促進(jìn)作閨，無淪是在細(xì)胞刮除后圳l、，或片Zlhl。 時，與干常時照組相比差異均女同著意義；進(jìn)一少皿架不向劑量I個S 付 uC－6 細(xì)胞遷移的影響，結(jié)果表明四X于湯總多搪以100pgil川－100p9’1ill為促進(jìn)糾＊ 遼 移的*劑量；觀察四君于湯總多糖在細(xì)1地刮除叭持續(xù)給藥4大（們當(dāng)于碩防川 藥）、以及在細(xì)胞刮除汕及刮除R體續(xù)用藥（怕當(dāng)十顱防爿。治療用藥）對1【－6 細(xì)胞修臭遷移的影響，都具有明顯的促進(jìn)受損細(xì)胞遷移的作用。提示四君于湯何 可能通過某些譏制影響小腸上皮細(xì)胞的遷移活動，從而激活上皮細(xì)胞的功能。 四君了湯中各單味藥多糖｛I EC－6細(xì)胞的遷移作用存在差異。細(xì)胞刮除當(dāng)時 給藥可見黨參多糖、付草多糖村1n－6細(xì)胞的遷移只有促進(jìn)作用，白術(shù)多糖對細(xì) 胞遷移無明顯影啊，俠學(xué)多糖則松見出明顯的抑制細(xì)胞遷移的作用；細(xì)胞刮除汕 持續(xù)給藥I天可見黨參多糖與付草多糖仍保持促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用，而白術(shù)多糖 與獲菩多糖則表現(xiàn)出輕微的抑制細(xì)胞遷移的作用，但二肯的起效時問不同，白術(shù) 多糖主要為細(xì)胞刮除后24小時出現(xiàn)抑制作用，而沃多多糖則在細(xì)胞刮除后8 ’h 互且 時出現(xiàn)抑制作用。與各單味藥多糖用比，四君于湯總多糖無論在細(xì)胞刮除即時給 藥，或者于細(xì)胞刮除的持續(xù)給藥，對大鼠1r－6的細(xì)胞遷移作用都具有明顯的優(yōu) 勢，實驗結(jié)果表明四君于湯總多糖的作用明顯憂于各單味藥多糖。 ：Z．四君于湯總多糖對N工－6細(xì)胞粘附功能的影吶 門工－6細(xì)胞接種于6孔襖L，1＆人換培養(yǎng)液 次，－于細(xì)胞栓種后第5人進(jìn)汀 消化計數(shù)，再次離心后，細(xì)胞以對照組培養(yǎng)液，含DF＊）的培養(yǎng)液，以及含DF＼10＋ 四君子湯總多糖的培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度到 SX 10‘／’d。這些細(xì)胞懸液在培 養(yǎng)箱中放置一定時問后接種到6孔培養(yǎng)板卜，在規(guī)定的時問采用倒置顯微鏡上裝 有的數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍攝，觀粱階＼們及四君于湯總