1.Deparaffinization/Rehydration
　　
　　1.1.Heatslidesinanovenat65°Cfor1hour.
　　
　　1.2.De-paraffinize/hydrateusingthefollowingseriesofwashes:twoXylenewashes（3mineach）,
　　
　　followedbytwo100%ethanolrinses（3mineach）,followedby95%ethanol,70%ethanol,50%
　　
　　ethanol,30%ethanol,followedbyTBSTwashfor3minonashaker.
　　
　　2.AntigenRetrieval
　　
　　ThisisrecommendedHeatInducedEpitopeRetrieval（HIER）usingDecloakingChamber/Pressure
　　
　　Cooker.HotwaterbathorMicrowavewithtemperaturesensorcanbealsoused（protocolwouldvary
　　
　　dependingonthemethodused）.
　　
　　2.1.Add500mlofdH2OtoDecloaker/PressureCooker.
　　
　　2.2.ImmerseslidesintostainingdishcontainingAntigenRetrievalSolution.Placestainingdishinto
　　
　　decloakingchamber.
　　
　　2.3.Programtorunfor30secondsat125°C,followedby10secondsat90°C.
　　
　　2.4.Letitcooldowntoroomtemperature（10–20minutes）.
　　
　　2.5.RemovesslidesandrinseinTBST.
　　
　　2.6.ProceedtoStainingstep.
　　
　　3.Staining
　　
　　3.1.WashslideswithTBSTfor3minonashaker.
　　
　　3.2.Inactivateendogenousperoxidasebycoveringtissuewith3%hydrogenperoxidefor5min.
　　
　　3.3.WashslidesthreetimeswithTBST（3mineachonashaker）.
　　
　　3.4.Blockslideswiththeblockingsolutionfor1hour.
　　
　　3.5.Diluteprimaryantibodyinprimaryantibodydiluentperrecommendationondatasheet.
　　
　　3.6.Applyprimaryantibodytoeachsectionandincubateovernightinthehumidifiedchamber（4oC）.
　　
　　3.7.WashslidesthreetimeswithTBST（3mineachonashaker）.
　　
　　3.8.ApplytoeachsectionsecondaryHRP-conjugatedanti-rabbitantibodydilutedintheblocking
　　
　　solutionpermanufacturer’srecommendation;incubatefor30minatroomtemperature.
　　
　　3.9.WashslidesthreetimeswithTBST（5mineachonashaker）.
　　
　　3.10.AddfreshlypreparedDABsubstratetothesectionsandincubateuntilstaindevelops（generally1
　　
　　min）.
　　
　　3.11.Rinsesectionswithwater.
　　
　　3.12.CounterstainwithHematoxylin（generally10seconds）.
　　
　　3.13.Rinsesectionswithwater.
　　
　　3.14.Dehydratesamplesusingtwowasheswith100%Ethanol（3mineach）,followedbytworinses
　　
　　withXylene（3mineach）.
　　
　　3.15.Mountcoverslipsonslidesusingpermanentmountingmedium