培養基傳代細胞制備操作方法

　　(一)原理

　　體外培養基的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養。

　　細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。

　　常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。細胞接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

　　(二)操作

　　1．將長成單層的原代培養細胞或HeLa細胞從二氧化碳培養箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養基液，加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜)，靜置5～10分鐘。

　　2．在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變園，相互之間不再連接成片，這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉，加入3～5ml新鮮培養液，吹打，制成細胞懸液。

　　3．將細胞懸液吸出2ml左右，加到另一個培養瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養箱中，繼續進行培養。

　　(三)結果

　　一般情況，傳代后的細胞在2小時左右就能附著在培養瓶壁上，2～4天就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。