細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

小鼠肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動脈經毛細血管進入肺靜脈，再入左心室，經過左心室收縮進入體循環(huán)，才能避免肺動脈內壓力升高。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。該細胞參與血管壁炎癥反應，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動脈疾病的靶細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

大鼠白介素7受體(IL-7R)試劑盒 ，英文名： IL-7R ELISA Kit

Mouse ierleukin 16 (IL-16) ELISA Kit 小鼠白介素16(IL-16)試劑盒

ELISA 小鼠心肌轉錄因子3(mouse GATA3)  進口分裝

CLIAKitforIP-10/CXCL10(Humanierferon-inducibleprotein10)ELISAKit人干擾素誘導蛋白10

通用型福氏志賀氏菌(Shigellaflexneri)試劑盒20次

ELISAKitLp-α大鼠脂蛋白α

小鼠白介素5(IL-5)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素4(IL-4)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素35（IL-35）試劑盒   96T/48T

小鼠白介素-33(IL-33)試劑盒   96T/48T

3號染色體開放閱讀框21抗體

小鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat soluble tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand (sAIL) ELISA Kit 大鼠可溶性壞死因子相關凋亡誘導配體(sAIL)試劑盒

HumanSH2-coainingprotein,SHC/SLP-76ELISAKit 人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAi-keratinaibody,AKA試劑盒人抗角蛋白抗體(AKA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物彌散吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量試劑盒(包括萃取)20次

HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorB，VEGF-BELISAKit人血管內皮細胞生長因子B(VEGF-B)試劑盒規(guī)格：96T/48T

磷酸化內質網核信號轉導蛋白a1抗體

EFNB2重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 Protein

GSK-3 Beta(NT 0.5mgGSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β(抗原)

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

EPHB4 Protein Human 重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標簽)

CFD Protein Mouse 重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

小鼠肺大靜脈平滑肌細胞GSK-3 Beta(NT 0.5mgGSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β(抗原)

EPHB4 Protein Human 重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標簽)

EFNB2重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 Protein

CFD Protein Mouse 重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取