細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

小鼠終板軟骨分離自椎間盤終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長發(fā)育過程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤。椎體終板構(gòu)成了椎間盤的上下邊界，位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤之間。是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體，同時(shí)具有平衡分散應(yīng)力的作用。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠終板軟骨采用膠原酶 - 聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠終板軟骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA 試劑盒

Rat ai sperm aibody (AsAb) ELISA Kit 大鼠抗抗體(AsAb)試劑盒

HumanconcanavalinA,ConAELISAKit 人刀A(ConA)試劑盒分裝

Humanangiopoietin-likeprotein3,ANGPTL3試劑盒人血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)試劑盒

植物鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次

IL-1αELISAKit魚類白介素1α(IL-1α)試劑盒

植物D2(VD2)ELISAKit   ELISA. 

植物D3(VD3)ELISAKit   ELISA. 

植物D(VD)ELISAKit   ELISA. 

植物B6(VB6)ELISAKit   ELISA.

電壓門控離子通道蛋白TPGS1抗體

6號染色體開放閱讀框64抗體

CD4重組大鼠 CD4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Connexin-45(CX45 0.5mgConnexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原)

ULBP2重組人 ULBP2 / N2DL-2 蛋白  Protein

ADSL Protein Human 重組人 ADSL / Adenylosuccinate Lyase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Connexin-45(CX45 0.5mgConnexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原)

ADSL Protein Human 重組人 ADSL / Adenylosuccinate Lyase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD4重組大鼠 CD4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ULBP2重組人 ULBP2 / N2DL-2 蛋白  Protein

小鼠終板軟骨細(xì)胞豬(HYD)ELISA 試劑盒

Human methylansferase (Methylase) ELISA Kit 人甲基化酶(Methylase)試劑盒

guineapigIerferonγ,IFN-γELISAKit 豚鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒分裝

CLIAKitforAng-IELISAKit大鼠血管緊張素Ⅰ

血液甘油三酯(iglyceride)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次

PorcineCompleme3,C3ELISAKit豬補(bǔ)體蛋白3(C3)試劑盒

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取