細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

小鼠肺血管平滑肌分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。肺血管平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞。肺血管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動(dòng)脈高壓；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素，新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肺血管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肺血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素6(IL-6)試劑盒 ，英文名： IL-6 ELISA Kit

Mouse ierleukin 1 beta (IL-1 beta) ELISA Kit 小鼠白介素1β (IL-1β)試劑盒

ELISA 小鼠組胺(mouse HIS)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforINSELISAKit大鼠胰島素

通用型副氏菌A(SalmonellaParatyphiA)定性試劑盒20次

ELISAKitApo-E大鼠載脂蛋白E

小鼠白介素1β(IL-1β)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素1α(IL-1α)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素18(IL-18)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素17(IL-17)試劑盒   96T/48T

6號染色體開放閱讀框97抗體

小鼠活化素A(Activin-A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 人神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)試劑盒

humanBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 人β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Mi2-aibody試劑盒人抗Mi2抗體(ai-Mi2-Ab)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物培養(yǎng)細(xì)胞DNA損傷彗星熒光試劑盒20次

HumanUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit人型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)試劑盒規(guī)格：96T/48T

磷酸化突觸后密度蛋白93抗體

IL7R重組大鼠 IL7R / IL7RA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

FAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase 0.5mgFAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase) Fas活化的絲/蘇激酶抗原

OMG重組人 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-420, His 標(biāo)簽) Protein

ERBB3 Protein Human 重組人 HER3 / ErbB3 蛋白 (aa 730-1065, His & GST 標(biāo)簽)

EFNA3 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

小鼠肺血管平滑肌細(xì)胞FAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase 0.5mgFAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase) Fas活化的絲/蘇激酶抗原

ERBB3 Protein Human 重組人 HER3 / ErbB3 蛋白 (aa 730-1065, His & GST 標(biāo)簽)

IL7R重組大鼠 IL7R / IL7RA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

EFNA3 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

OMG重組人 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-420, His 標(biāo)簽) Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取