細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮分離自肝動(dòng)脈組織；在胚胎期，肝臟有3條動(dòng)脈供血，分別來(lái)源于胃左動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈，這3條動(dòng)脈分別的不同部位。出生后，一般保留一條動(dòng)脈，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈，由其分出左、右肝動(dòng)脈供應(yīng)左、右半肝。偶爾也可見(jiàn)起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈。但也有2條動(dòng)脈并存的情況，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%），起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%），而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見(jiàn)。此外，還有5%像胚胎期一樣，3條動(dòng)脈同時(shí)存在。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈，如果肝臟沒(méi)有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí)，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈，如果在常見(jiàn)肝動(dòng)脈類型外，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈的一部分血流，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈。肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是襯于肝動(dòng)脈內(nèi)表面的單層扁平上皮，在炎癥時(shí)高表達(dá)黏附分子，與血流中白細(xì)胞表面黏附分子相互作用，從而介導(dǎo)白細(xì)胞穿越血管壁，亦屬一類非專職抗原提呈細(xì)胞。它們吞噬異物、細(xì)菌、壞死和衰老的組織，還參與集體免疫活動(dòng)，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動(dòng)脈硬化；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì)，如白血球進(jìn)出血管。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠二(MDA)試劑盒 ，英文名： MDA ELISA Kit

Mouse ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 小鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒

ELISA 小鼠內(nèi)皮細(xì)胞合酶(mouse eNOS)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforKLHELISAKit小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白

通用型大腸彎曲桿菌(Campylobactercoli)試劑盒20次

ELISAKitTGFβ2大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2

小鼠白介素15(IL-15)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素13(IL-13)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素12(IL-12/P70)試劑盒   96T/48T

小鼠白介素12(IL-12/P40)試劑盒   96T/48T

TOM1蛋白抗體

小鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuroophin 3 (-3) ELISA Kit 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)試劑盒

humanadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit 人促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-matedciullinatedvimeinaibody,MCV試劑盒人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氫/ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次

Humanurinarybladdercanceraigen,UBCELISAKit人膀胱癌抗原(UBC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-鈣粘附分子抗體

VEGFC重組大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, His 標(biāo)簽) Protein

FAS (Apo-a1; CD95; 0.5mgFAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 載脂蛋白-a1

CSTB重組人 Cystatin B / CSTB 蛋白 Protein

ERBB4 Protein Human 重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白

CD19 Protein Mouse 重組小鼠 CD19 / Leu-12 蛋白

小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Ractopamine/BSA 萊克多巴胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 1mgRactopamine/BSA 萊克多巴胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物

ERBB4 Protein Human 重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白

NS1重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural / NS1 蛋白 Protein

ESAM Protein Human 重組人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TNFRSF4重組人 TNFRSF4 / OX40 / CD134 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取