細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

小鼠脊髓神經(jīng)元分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結構，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區(qū)，主要由神經(jīng)細胞構成；在灰質區(qū)周圍為白質區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結構和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內含神經(jīng)絲、微管、內質網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內質網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內含有大量膠質細胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d，細胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強。培養(yǎng)20d后，死亡細胞明顯增加，細胞出現(xiàn)內空泡，突起粗細不均，甚至脫壁，發(fā)生細胞崩解。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠脊髓神經(jīng)元采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠脊髓神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒 ，英文名： TNFRSF1A ELISA Kit

Mouse granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒

MousesolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanImmunoglobulinM,IgMELISAKitM

微型RNA(miRNA)同位素探針制備試劑盒10次

ELISAKitAmAC-1大鼠巨噬細胞替代激活相關化學因子1

小鼠CXCR4(mouse CXCR-4)   作用：   ELISA 

小鼠皮質(mouse Coicosterone)   作用：   ELISA 

小鼠環(huán)氧化酶-2 (mouse COX-2)   作用：   ELISA 

小鼠結締組織生長因子(mouse CTGF)   作用：   ELISA

肌醇四磷酸激酶1抗體

小鼠鉤端IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒

Human cyclophilin A (CyPA) ELISA Kit 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)試劑盒

HumanLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit 人可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒 進口分裝

Humanai-teichoicacidaibody,TA試劑盒人抗0壁酸抗體(TA)試劑盒

植物線粒體粗提分離試劑盒10次

Humani-iodothyronine，T3ELISAKit人三甲狀腺原(T3)試劑盒

微絲相關蛋白1抗體

EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白  Protein

乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)

IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標簽)

NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2

小鼠脊髓神經(jīng)元細胞乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標簽)

EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白  Protein

NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2

IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取