ELISA試驗結果常見問題：
一、ELISA試驗出現非常弱的結果，常見有7種原因，其解決方法如下：
1)可能原因：溫育的時間或者溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
2)可能原因：顯色反應時間太短;
解決方法：校正定時鐘準確定時。
3)可能原因：所用配制緩沖液的蒸餾水有問題;
解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。
4)可能原因：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低;
解決方法：按照說明書保存試劑盒和準確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。
5)可能原因：酶標儀濾光片不正確;
解決方法：檢查酶標儀使用的濾光片。
6)可能原因：試劑盒沒有充分平衡;
解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。
7)可能原因：不正確的試劑儲存方式;
解決方法：按照說明書要求保存試劑盒。
二、 試驗結果白板，而且陽性對照不顯色，應如何分析和查找原因?
試驗結果白板，而且陽性對照不顯色，常見原因如下：
a)可能原因：漏加或者誤加試劑;
解決方法：檢查試驗記錄和剩余試劑。每次加液前均應核對標簽。
b)可能原因：試劑過期;
解決方法：使用有效期內的產品。
c)可能原因：洗板液配制中出現問題，如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氮鈉
等);
解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。
d)可能原因：溫育的時間或溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
e)可能原因：標準品失活或者丟失;
解決方法：標準品正確保存、溶解和混勻。
f)可能原因：抗體失活或者丟失;
解決方法：更換抗體或者提高抗體濃度
g)可能原因：酶失活或者丟失
檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入50ul的顯色底物，終止后顯色是否能達到1.0左右，此為酶的粗略估計。
解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。
h)可能原因：顯色底物失活
檢查方法：加少量的工作濃度的酶，TMB是否很快顯色。
解決辦法：更換顯色底物.
三、試驗結果空白背景高，這是什么原因造成的?
試驗結果空白背景高，常見原因如下：
a)可能原因：洗板不干凈;
解決方法：充分洗滌，*拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染。
b)可能原因：顯色液變質或者試劑過期;
解決方法：檢查試劑盒有效期。
c)可能原因：試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過高;
解決方法：請按說明書所示稀釋倍數配制;
d)可能原因：蒸餾水受酶等污染;
解決方法：使用新鮮蒸餾水;
e)可能原因：試劑混用;
解決方法：不同批號試劑勿混用。
f)可能原因：培養箱溫度超過37℃或反應時間過長。
解決方法：顯色反應時間適當縮短。
