細胞角蛋白免疫組化ELISA試劑盒說明書 細胞角蛋白 細胞角蛋白 細胞角蛋白 18 1818 18（ （（ （CK18 CK18 CK18 CK18） ）） ）      免疫組化試劑盒 免疫組化試劑盒 免疫組化試劑盒 免疫組化試劑盒     
該試劑盒以 HRP 標記的鏈霉親和素復合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內的特異性細胞角蛋白 18（CK18）抗
原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的細
胞角蛋白（CK）一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，zui
后加入 HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復合物，顯微鏡
下觀察成像。
 
 
 
 
試劑盒所含試劑 試劑盒所含試劑 試劑盒所含試劑 試劑盒所含試劑： ：： ：     
試劑 A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（選用）
試劑 B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型細胞角蛋白 18（CK18）一抗（2.5ml）
試劑 D （*分裝）生物素化羊抗兔 IgG 1 支
（濃度 1.5 mg/mL，稀釋比為 1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液 20ml
試劑 E HRP-SA 復合物 1 支（濃度 1 μM，稀釋比 1:50~1:200）100 μL
試劑 F DAB 顯色液 5ml
用戶自備試劑 用戶自備試劑 用戶自備試劑 用戶自備試劑： ：： ：     
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羥基氨基甲烷 1.21g
氯化鈉 7.6g 加蒸餾水 800mL，濃鹽酸調 pH 值至 7.2~7.4，zui后定容至 1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）
細胞角蛋白免疫組化ELISA試劑盒說明書2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調 pH 值至 6.0，zui后定容至 1000mL
或：0.5M EDTA 修復液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調 pH 值至 8.0，zui后定容至 1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL
4. Tween 20 5 mL
 
 
石蠟包埋組織切片免疫染色 石蠟包埋組織切片免疫染色 石蠟包埋組織切片免疫染色 石蠟包埋組織切片免疫染色     
實驗步驟 實驗步驟 實驗步驟 實驗步驟（ （（ （建議方案 建議方案 建議方案 建議方案）： ）： ）： ）：     
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復： 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復，
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
細胞角蛋白免疫組化ELISA試劑盒說明書12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明； 16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
注意事項 注意事項 注意事項 注意事項： ：： ：     
1. 修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致
結晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的 Tween 20，否則會
影響結果觀察。
5. 如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封
片。
附 附附 附 1 11 1： ：： ：     
抗原修復方法 抗原修復方法 抗原修復方法 抗原修復方法     
常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修復液（pH8.0 或
9.0）等等。
一 一一 一、 、、 、酶消化修復法 酶消化修復法 酶消化修復法 酶消化修復法     
切片脫蠟水化處理，TBS 沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
20~30min 后 TBS 沖洗即可。
二 二二 二、 、、 、微波抗原修復法 微波抗原修復法 微波抗原修復法 微波抗原修復法     
微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續微波 10~15min，取出微波
盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，
須自行調整。
三 三三 三、 、、 、直接高壓 直接高壓 直接高壓 直接高壓抗原修復法 抗原修復法 抗原修復法 抗原修復法     
取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復
液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時 1.5~2.5min 即可脫離熱源，自
然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。
四 四四 四、 、、 、隔水式高壓抗原修復法 隔水式高壓抗原修復法 隔水式高壓抗原修復法 隔水式高壓抗原修復法     
不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸
騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時
4~8 min 即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用
于較難檢測或核抗原的修復。 小鼠堿性磷酸酶（ALP）ELISA試劑盒  Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA試劑盒
小鼠血管生成素4（ANG-4）ELISA試劑盒  Mouse Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ（BMPR-Ⅱ）ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA試劑盒
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小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白（E-Cad）ELISA試劑盒 Mouse E-Cadherin,E-Cad ELISA試劑盒
小鼠CD30分子（CD30）ELISA試劑盒 Mouse Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA試劑盒
小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類（MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒  Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA試劑盒
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小鼠嗜酸粒細胞趨化因子（ECF）ELISA試劑盒 Mouse eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA試劑盒
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小鼠E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒  Mouse E-Selectin ELISA試劑盒