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細胞凍存具體流程及注意事項：
1、預先配制凍存液：
凍存液比例多種，根據細胞的特性進行調整凍存液的比例：
5%—10%DMSO + 20%—90%血清 + 0%—70%基礎培養液；
2、取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗1-2次；去掉培養瓶里的殘余血清；
3、加入適量yi 酶（濃度一般為0.25%），使yi 酶覆蓋整個瓶，放入培養箱消化；
4、細胞消化0.5-2min（具體時間根據鏡下形態判斷），顯微鏡下觀察細胞，細胞胞質回縮，細胞間不再連接成片，此時加入*培養基終止消化；
5、用巴氏吸管輕輕吹打細胞，形成細胞懸液，將細胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min；
6、棄上清，加入適量預先配制好的凍存液，巴氏吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中的細胞最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
7、將細胞分裝入凍存管中，每管1-1.5ml；
8、凍存管標記細胞名稱，凍存時間，操作者及細胞代數信息。
對于懸浮細胞凍存，則直接收集離心細胞，除去yi 酶消化的步驟，其他步驟相同。
注意事項:
1、需凍存保種的細胞應在生長良好且存活率高，其密度約為80-90％的狀態。細胞凍存前應保證細胞的活力好，無污染。
2、在細胞凍存過程中，所結的冰晶對細胞傷害較大，所以過程一定要慢。凍存或者復蘇最好用新配制的培養液。
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