96T大鼠膽固醇（CH）酶聯免疫分析 試劑盒使用說明書檢測范圍：
0.7nmol/L - 45nmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中膽固醇（CH）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇（CH）水平。用純化的大鼠膽固醇
（CH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇（CH），再
與 HRP 標記的膽固醇（CH）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后
加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃
色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇（CH）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度
（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇（CH）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑
6ml×1 瓶
8 標準品（64nmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板
96T大鼠膽固醇（CH）酶聯免疫分析 試劑盒使用說明書4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A 液
6 顯色劑 B 液
標本要求
12 孔×8 條
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
9 標準品稀釋液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
1.5ml×1 瓶
1 份
2 張
1 個
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
32nmol/L
16nmol/L
8nmol/L
4nmol/L
2nmol/L
5 號標準品
4 號標準品
3 號標準品
2 號標準品
1 號標準品
150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
96T大鼠膽固醇（CH）酶聯免疫分析 試劑盒使用說明書2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
操作程序總結：

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，