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樣本處理(樣本處理區)過程:
1、先對痰液樣本進行目測,若樣本中唾液占大部分,則需重新采集樣本。
2、目測合格后,在樣本中加入2~3倍體積4%的NaOH溶液,<采希?50rpm、37℃條件下處理30min或常溫下1Hr,使其充分液化(無明顯固狀物并且吸出時無拖絲現象即為液化*;若液化不*,可適當再加入少量4%的NaOH溶液直至液化*)。
3、取液化后的樣本900ul以及試劑盒中的陰性對照、強陽性對照和臨陽性對照各500ul于1.5ml無菌離心管中,13,000rpm離心10min。
4、棄上清(先倒出大部分液體,再用移液器盡量吸干至無明顯液滴為止),沉淀中加入1ml滅菌生理鹽水,大豆RR PCR檢測試劑盒振蕩懸浮(注意:按緊離心管蓋后,橫向按在旋渦振蕩器上將沉淀振起),13,000rpm離心10min。
5、棄上清,用1ml滅菌生理鹽水洗滌沉淀,13,000rpm離心10min。
6、棄上清,向沉淀中加入DNA提取液30ul,振蕩混勻,2,000rpm離心5sec,放37℃溫浴30min,再放入100℃水浴/干浴10min,13,000rpm離心10min,保留上清備用。(如果樣本裂解產物當天不使用,請于-20℃保存。)
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