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原代細(xì)胞純化注意細(xì)節(jié):
1、 移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)基。
2、使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶ye或EDTA清洗細(xì)胞。在培養(yǎng)瓶背著細(xì)胞的一面加入清洗溶液,通過轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶1到2分鐘清洗細(xì)胞層,然后去除清洗液。
3、加入yi 酶消化,消化細(xì)胞與細(xì)胞,操作手法,試劑的效價(jià)有密切的關(guān)系,消化時(shí)應(yīng)注意觀察細(xì)胞形態(tài),如細(xì)胞變得橢圓透亮,并且可以觀察到細(xì)胞與細(xì)胞間的間隙時(shí),輕拍瓶身可以看見成流沙狀,即可中止消化,消化時(shí)盡量減少對(duì)細(xì)胞的吹打。
4、當(dāng)細(xì)胞wan全分離時(shí),垂直放置培養(yǎng)瓶,讓細(xì)胞流到培養(yǎng)瓶的底部。在培養(yǎng)瓶中加入wan全培養(yǎng)基中止消化,計(jì)數(shù)并再次培養(yǎng)細(xì)胞。
5、對(duì)于無血清培養(yǎng)基,加入大豆yi 蛋白酶抑制劑。通常使用1∶1(v∶v)0.25 mg/mlyi 蛋白酶抑制劑到y(tǒng)i 蛋白酶中將抑制yi 蛋白酶活性。
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