免疫組化(IHC)，免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)，是一項利用抗原抗體反應(yīng)，通過使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對蛋白定位，定性的實驗技術(shù)。

免疫組化(IHC)試驗過程問題分析：

1、染色過強

a、 抗體濃度過高或孵育時間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜

b、 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度

c、DAB顯色時間過長或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

2、非特異性背景染色 

a、 操作過程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘

b、 組織中含過氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長 

c、 組織中含內(nèi)原性生物su 正常非免疫動物血清再封閉 

d、 血清蛋白封閉不充分 延長血清蛋白封閉時間

3、染色弱

a、 抗體濃度過低、孵育時間過短 提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘

b、 試劑超過有效使用時間 應(yīng)更換試劑

c、 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥）

d、 室溫太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜

 e、 蛋白封閉過度 封閉不要超過12分鐘

4、染色陰性

a、操作步驟錯誤 應(yīng)重試 設(shè)陽性對照 

b、 組織中無抗原 設(shè)陽性對照以驗證試驗結(jié)果

c、 一抗與二抗種屬連接錯誤 仔細(xì)確定一抗二抗種屬無誤