細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細(xì)胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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細(xì)胞系/株：

1、細(xì)胞系（Cell Line）：原代培養(yǎng)舞經(jīng)傳代成功即成細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系（Lineage of Cells）所組成。

2、細(xì)胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株（finitecell strain）；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuous cell strain）。對于人類腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

（一）初代培養(yǎng)

初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。

（二）細(xì)胞系

初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系（Finite Cell Line）；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系（Infinite Cell Line）。無限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化，具異倍體核型，有的可能已成為惡性細(xì)胞，因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。無限細(xì)胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說明已惡性化。這兩種不同性質(zhì)的無限細(xì)胞系，在國內(nèi)外文獻(xiàn)中對這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴(yán)格。為概念上的明確，本書中對有惡性的無限細(xì)胞系采用!°惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系!±一詞表示可能更妥。而對那些只具永生性而無惡性的細(xì)胞系，則用無限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系即可。當(dāng)前流傳的 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細(xì)胞系。

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