細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)非常重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，掌握好這些注意事項(xiàng)，能讓你的實(shí)驗(yàn)更順利。

首先，無(wú)菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細(xì)菌或霉菌污染，否則實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。

其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細(xì)胞類型來(lái)選擇合適的培養(yǎng)基和血清。

另外，也是細(xì)胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過(guò)程中也要定期補(bǔ)充。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細(xì)胞在消化分離后需要一定的時(shí)間來(lái)適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時(shí)間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。

此外，消化時(shí)間也要控制得當(dāng)。通常消化至肉眼可見(jiàn)微小組織顆粒即可，過(guò)長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重，影響細(xì)胞培養(yǎng)成活率。

最后，對(duì)于一些特殊類型的細(xì)胞，可能需要添加一些特殊的生長(zhǎng)因子來(lái)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。但需要注意的是，這些生長(zhǎng)因子的費(fèi)用通常較高。

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱：小鼠結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞

組織來(lái)源：正常結(jié)腸組織

種屬來(lái)源：小鼠

細(xì)胞簡(jiǎn)介：結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。結(jié)腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導(dǎo)致結(jié)腸癌，是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。因此，體外培養(yǎng)結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞為研究進(jìn)一步結(jié)腸癌等疾病提供了前提和基礎(chǔ)。

培養(yǎng)基：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：鋪路石狀，不規(guī)則細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性。

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

二、使用方法：

小鼠結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈鋪路石狀，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳根據(jù)細(xì)胞特性。；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

公司正在出售的產(chǎn)品：