小鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞簡介：小鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù)；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動(dòng)的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動(dòng)，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d，細(xì)胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強(qiáng)。培養(yǎng)20d后，死亡細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡，突起粗細(xì)不均，甚至脫壁，發(fā)生細(xì)胞崩解。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞基本屬性：

原代細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶蓋需擰松半圈。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。