細胞培養注意事項：

公司產品僅用于科研關于原代細胞培養的注意事項。原代細胞培養是一項非常重要的實驗技術，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關鍵。一定要保持操作環境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養基和血清也很重要。不同細胞對培養基和血清的需求不同，所以要根據細胞類型來選擇合適的培養基和血清。

另外，也是細胞培養中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養過程中，靜置培養也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應新環境，所以在這段時間內要避免頻繁取出培養瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導致細胞損傷加重，影響細胞培養成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。

一、細胞基本屬性

細胞名稱：大鼠子宮平滑肌細胞

組織來源：子宮組織

種屬來源：大鼠

細胞簡介：大鼠子宮平滑肌細胞分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持，這些結構受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。子宮肌層比較厚，由成束或成片的平滑肌組成，肌束間以結締組織分隔。子宮平滑肌具有收縮功能，收縮受激素的調節，其收縮活動有助于精子向輸卵管運送、經血排出以及胎兒娩出。子宮平滑肌層含有大量的血管，如果平滑肌層細胞過度生長，勢必造成血管壁的增厚，管腔堵塞，體外培養平滑肌細胞有利于研究子宮和其他富含血管器官的血管形成機制。子宮平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態：大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。子宮平滑肌細胞的主要功能：①子宮平滑肌能保持子宮的基本形態，在孕期能大化的擴張子宮容積，保證胎兒孕育環境；②平滑肌細胞有收縮舒張能力，在生產時能形成生理性的縮腹環，推動胎兒向下移動，輔助生產。

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

二、使用方法：

大鼠子宮平滑肌細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳可傳5代左右；3代以內狀態佳；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

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