大鼠牙髓干細胞

細胞簡介：干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞 ，它包括胚胎干細胞和成體干細胞 。  目前已經成功分離培養包括來自骨髓、肌肉、神經、上皮等組織的成體干細胞 。牙髓干細胞是位于牙髓組織的一種成體干細胞。  2000年 ，Gornhtos等首先成 功地分離培養出人牙髓干細胞 ，為干細胞的研究開辟了一個新的領域。牙髓干細 胞具有同其他成體干細胞相似的生物學特性,具有較強的克隆形成能力 ，可以分化 為牙髓組織中的終末功能細胞并具有一定的橫向分化能力。  目前國內外只有人牙 髓干細胞培養成功的報道,鼠牙髓干細胞的相關研究國內外還未見報道 ，而鼠是實 驗研究常用的模型,它具有取材容易、與人同源性較高等優點。

培養基：原代間充質干細胞培養體系

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

細胞基本屬性：

原代細胞培養方法：

1.準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7.計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8.培養：置于36.5℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶蓋需擰松半圈。

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注意事項：

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。