大鼠三叉神經元細胞

細胞基本屬性：

細胞簡介：大鼠三叉神經元細胞分離自三叉神經組織；三叉神經為粗大的混合性腦神經，含一般軀體感覺和特殊內臟運動兩種纖維。其特殊內臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經運動核，纖維組成三叉神經運動根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內側，后進入三叉神經第3支下頜神經中，經卵圓孔出顱，隨下頜神經分支分布于咀嚼肌等。運動根內還含有三叉神經中腦核有關的纖維，主要傳導咀嚼肌的本體感覺。三叉神經內以軀體感覺神經纖維為主，這些纖維的細胞體位于三叉神經節(半月節)內，該神經節位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經節由假單極神經元組成，其中樞突集中構成了粗大的三叉神經感覺根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦，止于三叉神經諸感覺核，其中傳導痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經脊束核；傳導觸覺的纖維主要終止于三叉神經腦橋核。三叉神經節細胞的周圍突組成三叉神經三大分支，即第1支眼神經、第2支上頜神經、第3支為下頜神經。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內、口腔、鼻腔、鼻旁竇的粘膜、牙、腦膜等，傳導痛、溫、觸等多種感覺。

培養基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.125%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養方法：

1.準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7.計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8.培養：置于36.5℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶蓋需擰松半圈。

注意事項：

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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