一、細胞基本屬性

細胞名稱：大鼠角膜基質(zhì)細胞

組織來源：眼角膜組織

種屬來源：大鼠

細胞簡介：大鼠角膜基質(zhì)細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質(zhì)細胞、膠原纖維和細胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復主要由角膜基質(zhì)細胞的增殖及分泌細胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質(zhì)細胞分泌組成基質(zhì)層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質(zhì)細胞，存在于角膜基質(zhì)層中，在正常情況下，處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質(zhì)細胞的應答反應，決定著角膜能否被修復。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

二、使用方法：

大鼠角膜基質(zhì)細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈梭形、多角形，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

公司正在出售的產(chǎn)品：

細胞培養(yǎng)注意事項：

公司產(chǎn)品僅用于科研關于原代細胞培養(yǎng)的注意事項。原代細胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術(shù)，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細胞對培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。

另外，也是細胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應新環(huán)境，所以在這段時間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導致細胞損傷加重，影響細胞培養(yǎng)成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。