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貨號 | FS-01S63465 |
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商品介紹:
測定意義
ICDHm(EC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環的限速酶之一,其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。
測定原理
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產品屬性:
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
ICDHm線粒體異檸檬酸脫氫酶微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | FS-01S63465 |
產品內容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
堿性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 1.5mL×1 支,4℃保存
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 1.6mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 1.9mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑五:液體 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。
NADH 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。
操作步驟:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min;取上清 200uL,加入等體積堿性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 堿性提取液,煮沸 5min(蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積堿性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 堿性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
注意事項:
1、公司產品僅用于科研操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加,必須分開加。
2、反應過程要注意避光。
3、當吸光值大于 1 時,建議稀釋后測量,計算公式中應當乘以稀釋倍數。
下列是公司正在熱銷的產品:
MEK1;2大鼠胰高血糖樣肽1mitogen-activated protein kinase kinase 1
細胞外信號調節激小鼠β干擾extracellular signal-regulated kinase 1;2
絲裂原活化蛋白激大鼠膽囊收縮/腸促肽mitogen activited protein kinase
真核起始因子結合蛋白1抗神經節抗體Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1
含ETS域Elk1蛋白小鼠肌鈣蛋白ⅠETS domain-containing protein Elk-1
丁酰膽酯大鼠腦腸肽Butyrylcholinesterase
丁酰膽酯抗髓鞘相關糖蛋白抗體Butyrylcholinesterase
丁酰膽酯小鼠血清淀粉樣蛋白AButyrylcholinesterase
碳酐小鼠抗中性粒/中心體抗體carbonic anhydrase
環加氧2大鼠6酮前列腺cyclooxygenase-2
葡萄糖苷抗中性粒顆粒抗體glucosidase
C1q腫瘤壞死因子相關蛋白13抗中性粒抗體C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 13
魏氏梭菌小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白Clostridium perfringens type
果膠甲酯大鼠載脂蛋白A1RAPIDASEPEP RAPIDASE
基質金屬蛋白13大鼠載脂蛋白B100matrix metalloproteinase 13
ICDHm線粒體異檸檬酸脫氫酶微量法乙酰A羧化Anti-GNG5 Antibody大鼠凋亡相關因子配體(FASL)elisa定量檢測試劑盒
性磷Anti-GNG5 Antibody大鼠鈣衛蛋白(CALPRO)elisa定量檢測試劑盒
α1性糖蛋白1/類粘蛋白1Anti-GNPDA1 Antibody大鼠膜聯蛋白A5(ANXA5)elisa定量檢測試劑盒
水通道蛋白-5抗原Anti-GNL3L Antibody大鼠凝血抗凝血復合物(TAT)elisa定量檢測試劑盒
糖尿病相關肽/胰島淀粉樣肽Anti-GNRH1 Antibody大鼠轉化生長因子β3(TGF-β3)elisa定量檢測試劑盒
β淀粉樣肽25-35/Aβ25-35/Amyloid β (25-35) (多肽)Anti-GORASP2 Antibody大鼠Apelin蛋白(APLN)elisa定量檢測試劑盒
β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽)Anti-GOLT1A Antibody大鼠叉頭框蛋白P3(FOXP3)elisa定量檢測試劑盒
甲胎蛋白多肽Anti-GORASP2 Antibody大鼠脂肪結合蛋白1(FABP1)elisa定量檢測試劑盒
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