產品內容：

酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

堿性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 1.5mL×1 支，4℃保存

試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.6mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；

試劑四：粉劑×1 支，4 ℃保存，用時加入 1.9mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；

試劑五：液體 0.7mL×1 支，4 ℃保存；

試劑六：液體 10mL×1 瓶，4 ℃保存；

試劑七：自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。

NAD 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。

NADH 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。

產品屬性：

商品介紹：

測定意義

CAD是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一，是木質素單體合成反應中的最后一步，催化多種不同的肉桂醛（香豆醛、芥子醛以及松柏醛等）生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

測定原理：

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH，在340nm下測定NADPH生成速率，即可反映CAD活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

注意事項：

1、公司產品僅用于科研操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加，必須分開加。

2、反應過程要注意避光。

3、當吸光值大于 1 時，建議稀釋后測量，計算公式中應當乘以稀釋倍數。

操作步驟：

一、NAD+和 NADH 的提?。?/span>

1、血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>

NAD+的提取：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min；取上清 200uL，加入等體積堿性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清，冰上保存待測。

NADH 的提取：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 堿性提取液，煮沸 5min(蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

2、組織中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>

NAD+的提?。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積堿性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

NADH 的提取：稱取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 堿性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>

NAD+的提取：收集 500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。

NADH 的提?。菏占?500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。

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