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貨號	FS-P013341

產品屬性:

產品名稱：質粒PET32a2μg
貨號：FS-P013341

規格：2μg

分類：DNA提取試劑盒

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

QQ截圖20200511164444.jpg

試劑配制:

1、酶標板：一塊（96孔）

2、標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、樣品稀釋液：1×20ml。

4、檢測稀釋液A：1×10ml。

5、檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優勢：

1. 特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2. 重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。

3. 靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4. 實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5. 優勢1：序列資源豐富，除公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6. 優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。

載脂蛋白A2檢測試劑盒

載脂蛋白A4檢測試劑盒

載脂蛋白B檢測試劑盒

載脂蛋白B100檢測試劑盒

載脂蛋白B48檢測試劑盒

載脂蛋白E檢測試劑盒

整合α2β1檢測試劑盒

整合α5檢測試劑盒

整合αVβ3檢測試劑盒

整合β1檢測試劑盒

正常T表達和分泌因子檢測試劑盒

脂蛋白a檢測試劑盒

脂蛋白α檢測試劑盒

脂蛋白磷脂A2檢測試劑盒

脂蛋白脂檢測試劑盒
質粒PET32a2μg天青Ⅱ AR鄰二甲 for HPLC,≥96.0% (GC)VD3 ELISA Kit 大鼠D3

對基-N,N-二乙基硫鹽 AR,98%呫噸-9-羧 98%VD2 ELISA Kit 大鼠D2

俾斯麥棕Y Biological stain(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)釔 99%VE ELISA Kit 大鼠E

鄰甲酞絡合劑 indicator無水氯化釔粉末,99.99% metals basisVA ELISA Kit 大鼠A

鄰甲酞絡合劑 98%亞硫鋅 98%Beta-TG ELISA Kit 大鼠β血小板球蛋白/β血栓環蛋白

一次性手套氫氯二茂鋯 95%PF-4/CXCL4 ELISA Kit 大鼠血小板因子4

一次性手套（小號）硝氧鋯水合物 AR,99.5%DHT ELISA Kit 大鼠雙氫睪酮

N-溴代丁二酰亞 AR,99.00%溴化鋅 CP,98.0%CTGF ELISA Kit 大鼠結締組織生長因子

使用方法:

一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。

8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。