產(chǎn)品名稱：人白細胞調(diào)節(jié)素（LR）ELISA試劑盒
    ：021—60449724， 
    產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T 
    檢測方法：ELISA酶聯(lián)免疫 
    待檢樣本：體液，血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清液，尿液，組織勻漿,心房水標本等等。 
    保存條件：2-8℃ 
    ELISA方法的幾大類型總結(jié) 

     ELISA方法的幾大類型總結(jié)，根據(jù)ELISA所用的固相載體而區(qū)分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一類是用硝 酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA（Dot-ELISA）;再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根據(jù)其性質(zhì)不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。 

    1.間接ELISA　本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。 

    （1） 材料 

    ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液； 

    ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清； 

    ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 

    （2） 方法步驟 

    ① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干 

    ③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干 

    ④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液 

    ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。 

    （3） 結(jié)果判定　已知陽性血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽性血清的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性，否則判為陰性。 

    2.雙抗體夾心ELISA　本法主要用于檢測大分子抗原。現(xiàn)以檢測雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。 

    ① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 

    ③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 

    ④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液 

    ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

    3.雙夾心ELISA　此法與雙抗體夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種抗體，還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為： 

    ① 加抗體（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ③ 加用非同種動物生產(chǎn)的特異性抗體（Ab-2）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ④ 加入酶標抗Ab-2抗體（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 

    ⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

    4.競爭ELISA　此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為： 

    ① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 

    ④ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

    被結(jié)合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結(jié)構不同，還需應用不同的結(jié)合方法。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。 

    5.阻斷ELISA　本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬病（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序： 

    ① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 

    ⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 

    ⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

    本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。 

    6.抗體捕捉ELISA　本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據(jù)所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為： 

    ① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干 

    ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干 

    ③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 

    ④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 

    ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

    7.斑點ELISA（Dot-ELISA）　與常規(guī)的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節(jié)省抗原等優(yōu)點，而且結(jié)果可長期保存；但其也有不足，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為： 

    （1） 載體膜的預處理及抗原包被　取硝 酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝 酸纖維素膜*干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。 

    （2） 封閉　將硝 酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。 

    （3） 加被檢血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。 

    （4） 加酶標抗體，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。 

    （5） 顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。 

    （6） 結(jié)果判定　以陽性、陰險血清作為對照，膜片中央出現(xiàn)深棕紅色斑點者為陽性反應，否則為陰性反應。 

    8.布ELISA（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學者Blais, B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應提供較大的表面積，提高反應的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序為： 

    （1） 首先把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉； 

    （2） 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次； 

    （3） 加酶標記的抗布氏桿菌抗體，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次； 

    （4） 加入底物液顯色； 

    （5） 測定OD值，ELISA方法的幾大類型總結(jié)。 

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