elisa kit  檢測試劑盒  人黑色素瘤轉移表面黏附分子
    產品名：人黑色素瘤轉移表面黏附分子（MMSAM）ELISA試劑盒 
    ：021—60449724， 
    產品規格：48T/96T 
    保存條件：2-8℃ 
    主要作用：研究使用 
    ELISA操作步驟 
     方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 
    1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。 
    2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。 
    3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。 
    4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。 
    5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。 
    6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-” 號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規定的陰 性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 
    方法二　用于檢測未知抗體的間接法：　　　 
    用包被緩沖液將已知抗原稀釋至 1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小 時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用 DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。 
    試劑器材 
    　　1.　試劑 
    （1）　包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）: 
    NaCO3　1.59克　NaHCO3　 2.93克　　加蒸餾水至1000ml　　 
     （2）　洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M　KH2PO4 0.2克　Na2HPO4·12H2O　2.9克　NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml 
    （3）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等 血清與洗滌液配成5～10％使用。 
    （4）　終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。 
    （5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml　0.1M 檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml　加蒸餾水50ml。 
    （6）　TMB（四甲基聯苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇） 0.5ml底物緩沖液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2　32μl 
    （7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5） 1ml　3％H2O2　2μl 
    （8）　抗原、抗體和酶標記抗體。 
    （9）　正常人血清和陽性對照血清。 
    2.　器材: 
    （1）　聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。 
    （2）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。 
    （3）　4℃冰箱，37℃孵育箱。 
elisa kit  檢測試劑盒  人黑色素瘤轉移表面黏附分子