上海恒遠生物長期供應各種科研類ELSIA試劑盒|檢測試劑盒|酶聯免疫試劑盒|生化試劑盒|免疫組化試劑盒|放免試劑盒|分子生物學試劑盒|金標檢測試劑盒|OMEGA試劑盒|細胞調亡試劑盒…
    產品名稱：人內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑（vaspin）ELISA試劑盒 
    ：021—60449724，
    產品規格：96人份/48人份
    各種種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…多年專業酶免服務，質量保證，免費提供代測服務。
    標本齊全：血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
    保存條件：2-8℃
    標本的稀釋原則：
    首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。
    標準品的稀釋原則：2瓶，使用前于6000-10000rpm離心30秒。每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以 上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為10 ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋10 ng/ml, 5 ng/ml, 2.5 ng/ml, 1.25ng/ml, 0.62 ng/ml, 0.32ng/ml, 0.16 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內配制，用完丟棄，下次檢測使用新鮮配置的標準品。
    如配制5 ng/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）10 ng/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
    生物素標記抗體的稀釋原則：
    打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔 100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時 內配制。
    辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：
    打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每 孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
人內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑（vaspin）ELISA試劑盒  操作步驟
    實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應直接對準液面，切勿沿孔壁加樣。
     加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
    為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
     棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
     溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
     每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。
     溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
     依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。
     依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
     用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
    實驗備注
     用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
     每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及終止液。測量時先用此孔調OD值至零。
     為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
     未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
     建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    洗板方法
    手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
    自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
    計算
    以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應 的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣 品的實際濃度。
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