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上海恒遠生物科技有限公司
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021—60449724
傳 真： 86-
人免疫球蛋白重鏈可變區（IgHV）ELISA試劑盒酶聯免疫法
樣品形式：血清/血漿/細胞培養上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）
保存與運輸：短期4℃/長期-20℃保存
應用范圍：科研用檢測試劑
試劑盒操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應直接對準液面，切勿沿孔壁加樣。
加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。
依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
實驗備注
用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及終止液。測量時先用此孔調OD值至零。
為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應 的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣 品的實際濃度。
注意事項
當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
底物請避光保存。
不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
試劑盒保存：未開封的試劑盒應儲存于2-8℃；開封后的酶標板應與干燥劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產品在有效期內可正常使用。
濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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人免疫球蛋白重鏈可變區（IgHV）ELISA試劑盒酶聯免疫法
樣品形式：血清/血漿/細胞培養上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）
保存與運輸：短期4℃/長期-20℃保存
應用范圍：科研用檢測試劑
試劑盒操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應直接對準液面，切勿沿孔壁加樣。
加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。
依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
實驗備注
用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及終止液。測量時先用此孔調OD值至零。
為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應 的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣 品的實際濃度。
注意事項
當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
底物請避光保存。
不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
試劑盒保存：未開封的試劑盒應儲存于2-8℃；開封后的酶標板應與干燥劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產品在有效期內可正常使用。
濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
人免疫球蛋白重鏈可變區（IgHV）ELISA試劑盒
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