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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
53059 BORIS/CT27 腫瘤/睪丸抗原27抗體(高遷移率族蛋白) 0.2ml
53060 phospho-GAP43(Ser41) 磷酸化神經生長相關蛋白43抗體 0.1ml
53061 CDCA7L 細胞分裂周期相關蛋白JPO2抗體 0.2ml
53062 ETS2 癌基因ETS2抗體 0.2ml
53063 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來源免疫組化用抗體) 0.1ml
53064 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來源免疫組化用抗體) 0.1ml
53065 ETV7 轉錄因子ETV7抗體 0.2ml
53066 LMO4 乳腺腫瘤自身抗原LMO4抗體 0.2ml
53067 GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來源免疫組化用抗體) 0.1ml
53068 GCDGP15/SABP 囊性組織液體蛋白15抗體 0.1ml
53069 GNAI3 抑制型G蛋白α3抗體 0.2ml
53070 NFEM5/IRF4/MUM1 淋巴細胞特異性干擾素調節因子抗體 0.2ml
53071 CXCR3/CD183 細胞表面趨化因子受體3抗體 0.1ml
53072 CXCR3/CD183 細胞表面趨化因子受體3抗體 0.1ml
53073 CXCR5/CD185 細胞表面趨化因子受體5抗體 0.1ml
53074 NARG2 *受體調節蛋白2抗體 0.2ml
53075 PATZ1 轉錄調節因子MAZR抗體 0.2ml
53076 Gastrin 胃泌素/蛙皮素抗體 0.1ml
53077 Gastrin receptor/GASR 促胃泌素受體抗體 0.1ml
53078 GATA-1 珠蛋白轉錄因子1抗體 0.1ml
53079 phospho-GATA1(ser142) 磷酸化珠蛋白轉錄因子1抗體 0.1ml
53080 phospho-GATA1(ser310) 磷酸化珠蛋白轉錄因子1抗體 0.1ml
53081 GATA-2 GATA結合蛋白2抗體 0.1ml
53082 GATA-3 GATA結合蛋白3抗體 0.1ml
53083 GATA-4 GATA結合蛋白4抗體 0.1ml
53084 GATA-5 GATA結合蛋白5抗體 0.1ml
53085 GATA6 GATA結合蛋白6抗體 0.1ml
53086 phospho-GATA6(Tyr271) 磷酸化GATA結合蛋白6抗體 0.1ml
53087 Gax 生長終止特異性同源盒基因抗體 0.2ml
53088 PLAG1 多型性腺瘤基因1蛋白抗體 0.2ml
53089 GCN2 蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.2ml
53090 Phospho-GCN2 (Thr899) 磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.1ml
53091 phospho-GCN2 (Thr667) 磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.1ml
53092 GCP-2 粒細胞趨化蛋白2抗體 0.1ml
53093 CXCL7/NAP-2/PPBP 血小板趨化因子7蛋白抗體 0.1ml
53094 CXCL9/MIG γ干擾素誘導單核細胞因子抗體 0.1ml
53095 CXCL11 干擾素誘導T細胞趨化因子抗體 0.2ml
53096 CXCL13/BCA1 B-淋巴細胞趨化因子抗體 0.1ml
53097 CXCL13/BCA1 B-淋巴細胞趨化因子抗體 0.1ml
53098 CXCL15/Lungkine 趨化因子CXCL15抗體 0.2ml
53099 GCK/Glucokinase 葡萄糖激酶抗體 0.1ml
53100 GCS/glucosylceramide synthase *半*γ合成酶抗體 0.1ml
53101 Plzf 早幼粒細胞白血病鋅指蛋白抗體 0.2ml
53102 CSF3/G-CSF 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3抗體 0.1ml
53103 GDIA1 腫瘤轉移抑制基因GDIA1抗體 0.1ml
53104 GDIA2/ARHGDIB 腫瘤轉移抑制基因GDIA2抗體 0.1ml
53105 G-CSFR/CD114 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體 0.1ml
53106 GKRP 葡萄糖激酶調節蛋白抗體 0.2ml
53107 GDF-1 生長、分化因子1抗體 0.1ml
53108 GDF3 生長分化因子3抗體 0.1ml
53109 GDF8/MSTN 生長分化因子8抗體 0.2ml
53110 GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml
53111 GDF9 生長分化因子9抗體 人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒0.1ml
53112 GDF15/MIC-1 生長分化因子15/巨嗜細胞抑制因子1抗體 0.1ml
53113 GDNF 膠質細胞源性神經營養因子抗體 0.1ml
53114 Ribonuclease 6 核糖核酸酶6抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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