當前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術文章>>如何檢測谷物種子萌發時淀粉酶活力測定
幾乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是萌發的禾谷類種子,淀粉酶活性zui強。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。種子萌發時,淀粉酶活性隨萌發時間迅速增加,將淀粉分解成小分子糖類,供幼苗生長。α-淀粉酶隨機水解淀粉的α-1,4-糖苷鍵,作為淀粉分解的起始酶而起主要作用;其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖;β-淀粉酶水解非還原端的第二個α-1,4-糖苷鍵,水解產物為麥芽糖,并能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料,測定其中α-淀粉酶和β-淀粉活性的差異。
【原理】
兩種淀粉酶具有不同理化特性,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速鈍化;β-淀酶不耐熱,在70℃下15min則被鈍化。據此,在測定時鈍化其中之一,就可以測定出另一種酶的活力,本實驗采用加熱鈍化β-淀粉酶測出α-淀粉酶活力,再與非鈍化條件下測得的總淀粉酶活力比較,求出β-淀粉酶活力。淀粉的水解產物麥芽糖及其它還原糖能與3,5-二硝基水楊酸試劑反應,使其還原生成紅色3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內,其顏色深淺與淀粉酶水解產物的濃度成正比,可用麥芽糖(或葡萄糖)濃度表示,用比色法測定淀粉生成的還原糖的量,以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。
【儀器與用具】
分光光度計;離心機;恒溫水浴;研缽;具塞刻度試管(25ml×13);刻度吸管(1ml,2ml,5ml各1支);容量瓶(50ml×2)。
【試劑】
麥芽糖標準液(1mg/ml):稱取100mg麥芽糖,用蒸餾水溶解并定容至100ml;DNS試劑(3,5-二硝基水楊酸):稱取3,5-二硝基水楊酸1g,溶于20ml 12mol/L NaOH溶液中,加入50ml蒸餾水,再加入30g酒石酸鉀鈉,待溶解后用蒸餾水定容至100ml。蓋緊瓶塞,勿使CO2進入。若溶液混濁可過濾后使用;0.1mol/L pH5.6的檸檬酸緩沖液:A液(0.1mol/L檸檬酸)—稱取分析純檸檬酸21.01g,用蒸餾水溶解并定容至1L;B液(0.1mol/L檸檬酸鈉)—稱取檸檬酸鈉29.41g用蒸餾水溶解并定容至1L;取A液55ml與B液145ml混勻,即為0.1mol/L pH5.6的檸檬酸緩沖液; 1%淀粉溶液:稱取1g淀粉溶于100ml 0.1mol/L pH5.6的檸檬酸緩沖液中。
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