人胚胎干細(xì)胞,E1C4細(xì)胞 細(xì)胞周期測(cè)定實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞計(jì)數(shù)法:
實(shí)驗(yàn)方法原理 體外培養(yǎng)細(xì)胞 生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來(lái)表示。它與生長(zhǎng)曲線(xiàn)有一定的,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長(zhǎng)期。
細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞種類(lèi)齊全,上信息發(fā)布數(shù)量有限,為了能及時(shí)快速確認(rèn)您所需要的細(xì)胞是否提供,請(qǐng)*時(shí)間細(xì)胞庫(kù)管理員:(,)
人胚胎干細(xì)胞,E1C4細(xì)胞 分裂指數(shù)指細(xì)胞 群體中分裂細(xì)胞 所占的百分比,它是測(cè)定細(xì)胞 周期的一個(gè)重要指標(biāo),也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)胞
試劑、試劑盒 胰酶 甲醇 培養(yǎng)液 冰醋酸 Giemsa染液
儀器、耗材 CO2培養(yǎng)箱 普通顯微鏡 培養(yǎng)皿 蓋玻片 吸管
實(shí)驗(yàn)步驟 一、消化細(xì)胞 ,將細(xì)胞 懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。
二、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),使細(xì)胞長(zhǎng)在蓋片上。
三、取出蓋片,按下列順序操作:
PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來(lái)水沖洗。
四、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。
五、計(jì)算
分裂指數(shù)=分裂細(xì)胞 數(shù)/總細(xì)胞 數(shù)×100%
展開(kāi)
注意事項(xiàng) 1. 操作時(shí)動(dòng)作要輕,以免使蓋片上的細(xì)胞脫落。
其他 一、Giemsa染液配制
稱(chēng)Giemsa粉末0.5 g,加幾滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油總量為33 ml)。56℃中保溫90-120分鐘。加入33 ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液。使用時(shí)按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。
BrdU參入法
實(shí)驗(yàn)方法原理 細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。
單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。
BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過(guò)兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染。計(jì)分裂相中各期比例,就可算出細(xì)胞周期的值。
實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)胞
試劑、試劑盒 BrdU 甲醇 冰醋酸 Giemsa染液 秋水仙素 SSC 檸檬酸三鈉 NaCl
儀器、耗材 冰箱 玻片 水浴鍋 鍋蓋 紫外燈 光學(xué)顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟 一、試劑配制
1. BrdU配制
BrdU 10 mg加雙蒸水10 ml ,4℃下避光保存。
2. 2×SSC配制
NaCl 1.75 g,檸檬酸三鈉0.88 g,加水至100 ml,4℃保存。
二、細(xì)胞生長(zhǎng)至指數(shù)期時(shí),向培養(yǎng)液中加入BrdU,使zui終濃度為10 μg/ml。
三、44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1 μg。
四、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
五、常規(guī)染色體制片。
六、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6 cm處紫外照射30分鐘。
七、棄去2×SSC液,流水沖洗。
八、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
九、鏡檢100個(gè)分裂相,計(jì)*、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
人肺腺癌細(xì)胞 SPC-A1細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 H125細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺癌細(xì)胞 H1299細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺癌細(xì)胞 TKB-1細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺腺癌細(xì)胞,LTEP-a-2細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺腺癌細(xì)胞,Lu-165細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H460細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺腺癌細(xì)胞,SPC-A-1細(xì)胞 規(guī)格(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,095-D細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺鱗癌細(xì)胞,SK-MES-1細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H661細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞,NCI-H292細(xì)胞 (T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人肺退行性癌細(xì)胞,Calu-6細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
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人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H358細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,HCC827細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H1688細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H1299細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人胚肺二倍體細(xì)胞,2BS細(xì)胞(T25培養(yǎng)瓶@密度75%)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
人支氣管上皮樣細(xì)胞,BEAS-2B細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞,Hs 578T細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺癌細(xì)胞,MDA-MB-468-06細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞,BT-474細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺癌細(xì)胞,HCC1937細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人前列腺癌細(xì)胞,PC-3細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺癌細(xì)胞,ZR-75-30細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺癌細(xì)胞,MCF7細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人乳腺癌細(xì)胞,BC009細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
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人乳腺癌細(xì)胞,BC-022細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
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人胚胎干細(xì)胞,E1C4細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
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人宮頸癌細(xì)胞,H1HeLa細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))
人卵巢癌細(xì)胞,Caov-3細(xì)胞 (1×T25培養(yǎng)瓶#密度75% 提供技術(shù)服務(wù))