A2780細胞 cDNA文庫不同于基因組文庫，被克隆DNA是從mRNA反轉錄來源的DNA。CDNA組成特點是其中不含有內含子和其他調控序列。從而做cDNA克隆時應是先從獲得mRNA開始，在此基礎上，通過反轉錄酶作用產生一條與mRNA相互補的DNA鏈，然后除掉mRNA，以*條DNA鏈為模板復制出第二條DNA鏈（雙鏈）；再進一步把此雙鏈插入原核或真核載體。

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A2780細胞  反轉錄酶催化合成cDNA

1．在置于冰上的無菌微量離心管內混合下列試劑進行cDNA*鏈的合成：
poly(A)+RNA (1μg/μl)                         10μl
寡核苷酸引物(1μg/μl)                          1μl
1mol/L Tris-HCl (pH8.0, 37℃)                    2.5μl
1mol/L KCl                                    3.5μl
250 mmol/L MgCl2                               2μl
dNTP溶液（含4種dNTP，每種5mmol/L）        10μl
0.1 mol/L DTT                                   2μl
RNase抑制劑（選用）                          25單位
加H2O至                                      48μl
2．當所有反應組在0℃混合后，取出2.5μl反應液轉移到另一個0.5ml微量離心管內。在這個小規模反應管中加入0.1μl [α-32P] dCTP（400 Ci/mmol, 10mCi/ml）。
3．大規模和小規模反應管都在37℃溫育1h。
4．溫育接近結束時，在含有同位素的小規模反應管中加入1μl 0.25mol/L EDTA，然后將反應管轉移到冰上。大規模反應管則在70℃溫育10 min，然后轉移至冰上。
5．參考《分子克隆實驗指南》第三版附錄8所述方法，測定0.5μl小規模反應物中放射性總活度和可被三（TCA）沉淀的放射性活度。此外，用合適的DNA分子質量參照物通過堿性瓊脂糖凝膠電泳對小規模反應產物進行分析是值得的。
6．按下述方法計算cDNA*鏈的合成量（推算方法略）：
    [摻入的活度值(cpm)/總活度值]×66(μg)=合成的cDNA*鏈(μg)
7．盡可能快地進行cDNA合成的下一步驟。 

人肺腺癌細胞 SPC-A1細胞 規格（T25培養瓶@密度75%）
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人肺癌細胞 H1299細胞 規格（T25培養瓶@密度75%）
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人羊膜細胞，HA細胞 （1×T25培養瓶#密度75% 提供技術服務）
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