細胞:H1688細胞
中文名稱:人小細胞肺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
熒光株:H1688-RFP熒光標記細胞株 H1688-GFP熒光標記細胞株 H1688-LUC熒光標記細胞株
耐藥株:H1688-DDP耐藥株 H1688-PTX耐藥株 H1688-ADM耐藥株
細胞檢測服務:H1688細胞鑒定(細胞檢測技術服務可直接咨詢客服)
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ADV核酸檢測實驗:
1.(標本預處理)血清、血漿等液體標本:吸取液體標本100ul至新的潔凈的1.5ml離心管,加入100ul核酸提取液A,13,000rpm離心3min,去上清保留約50ul沉淀。
2.(標本預處理)肝、脾、淋巴結等組織:用適量滅菌生理鹽水清洗送檢的組織的血液;取大約100mg的組織,加入1ml的滅菌生理鹽水用勻漿研磨成組織漿,移至新的1.5ml離心管,13,000rpm離心5min,去上清留沉淀;
DNA提取:向上述標本中加入50μl核酸提取液B充分混勻,100℃烈解10min。13,000rpm 離心3min,備用。
陰性質控品:取50ul陰性質控品,加50ul核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液4ul做PCR反應。
ADV陽性質控品:直接取4ul進行PCR擴增,或按照PCR擴增介紹方法進行定量分析。
PCR擴增:
從試劑盒中取出ADV–PCR MIX、Taq酶系,室溫融化并振蕩混勻后,10,000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+4管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑:ADV–PCR MIX 用量:24μl
試劑:Taq酶系 用量:2μl
貼壁細胞簽收操作:
1. 收到細胞后請盡快更換為含 15% 血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加 10% 的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過 72 小時)
2. 貼壁細胞收到后切忌立刻進行消化,將細胞換液后放置培養箱孵育 6-8 小時或過夜再做消化傳代。
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細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。