細胞:H1688細胞
中文名稱:人小細胞肺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
來源:ATCC細胞庫
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
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細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。
(ADV)核酸擴增檢測:
計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10,000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入26μl,向每管中加入處理后樣品(所獲得的cDNA樣品)或ADV–陽性質控品(使用前用陰性質控品梯度稀釋10倍、100倍、1000倍,記為1×10P6PCopies/ml,1×10P5PCopies/ml,1×10P4PCopies/ml)和陰性質控品4μl,10,000rpm瞬時離心30秒。將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內,按對應順序設置陰性控品,陽性定量標準品以及未知標本,并設置反應體積(30μl)、樣品名稱、標記熒光基團種類(報告基團為FAM,淬滅基團為TAMRA)和循環條件:
ABI PRISM 7700,ABI PRISM5700,ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反應蓋),ABI PRISM7300/7500(使用8聯管),MJ Opticon(使用8聯管)等使用薄壁管的儀器,循環條件:94℃→2分鐘,后93℃ 30秒→55℃ 45秒, 40個循環。
LightCycler等使用毛細管的儀器,循環條件:94℃→2分鐘,后93℃ 5秒→56℃ 45秒,共40個循環。
結果分析判定:
反應結束后保存檢測數據文件。根據分析后圖像調節baseline的start值(3-8),stop值(13-18)以及Threshold值,使Std curve 窗口下的標準曲線達到最佳(correlation數值介于-0.97~-1之間,correlation數值等同于∣r∣值),最后到Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數值(Qty-Copies/ml)。